[發(fā)明專利]人肺腺癌早期診斷用長鏈非編碼RNA序列及制備、應用

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• 申請?zhí)枺?/td>: 201710174368.3
• 申請日: 2017-03-22
• 公開（公告）號: CN106967718A
• 公開（公告）日: 2017-07-21
• 發(fā)明（設計）人: 高山;高弈航;張常;王亮
• 申請（專利權）人: 中國科學院蘇州生物醫(yī)學工程技術研究所
• 主分類號: C12N15/113
• 分類號: C12N15/113;C12N15/11;C12N15/63;C12Q1/68;A61K45/00;A61P35/00
• 代理公司: 北京三聚陽光知識產(chǎn)權代理有限公司11250
• 代理人: 李敏

1.一種長鏈非編碼RNA，其特征在于，所述長鏈非編碼RNA的cDNA序列如SEQ ID NO.1所示。

2.一種可特異性識別如權利要求1所述的長鏈非編碼RNA的引物組，其特征在于，所述引物組包括如下引物：

引物GSP1，其核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示；

引物GSP2，其核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示；

引物GSP3，其核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示；

引物GSP4，其核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示；

引物GSP5，其核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示；

引物GSP6，其核苷酸序列如SEQ ID NO.7所示。

3.一種制備如權利要求1所述的長鏈非編碼RNA的全長cDNA序列的方法，其特征在于，包括如下步驟：

1)提取肺癌細胞總RNA；

2)以步驟1)中提取的總RNA反轉錄為cDNA，以所述cDNA為模板，利用權利求2中所述的引物組擴增linc00857特異片段，將所述擴增的linc00857特異片段克隆至載體上，然后進行測序驗證所述序列的正確性；

3)以步驟1)提取的總RNA為模板，以3'-RACE CDS Primer A為引物進行反轉錄，獲得3'末端的cDNA；

4)以步驟3)中獲得的cDNA為模板，用10X Universal Primer A Mix和引物GSP5擴增所述linc00857的3'端序列，然后克隆至載體上，通過測序獲得所述linc00857的3'端序列；

5)以步驟1)提取的總RNA為模板，用反轉錄引物5'-RACE CDS Primer A和接頭引物SMARTer II A Oligonucleotide，將所述總RNA反轉錄，獲得5’末端的cDNA；

6)以步驟5)中獲得的cDNA為模板，用10X Universal Primer A Mix和引物GSP2擴增所述linc00857的5’端序列，然后克隆至載體上，通過測序獲得所述linc00857的5’端序列；

7)將上述步驟4)得到的3’末端片段和步驟6)所得到的5’末端片段拼接得到所述長鏈非編碼RNA的全長cDNA序列。

4.權利要求1所述的長鏈非編碼RNA在制備早期診斷或治療人肺腺癌的產(chǎn)品中的用途。

5.一種引物對，其特征在于，所述引物對用于檢測權利要求1所述的長鏈非編碼RNA在細胞和組織中的表達水平；所述引物對包括上游引物linc00857-F和下游引物linc00857-R，所述上游引物linc00857-F的核苷酸序列如SEQ ID NO.8所示，所述下游引物linc00857-R的核苷酸序列如SEQ ID NO.9所示。

6.一種用于人肺腺癌早期診斷的試劑盒，其特征在于，包括權利要求5所述的引物對。

7.一種用于人肺腺癌早期診斷的qRT-PCR反應體系，其特征在于，包括：

Green dye，10μL；

權利要求5中所述的上游引物linc00857-F，10μM,0.4μL；

權利要求5中所述的下游引物linc00857-R，10μM,0.4μL；

ROX，0.4μL；

模板，2μL；

dH₂O，6.8μL。

8.一種如權利要求1所述的長鏈非編碼RNA的RNAi靶位點的核苷酸序列，其特征在于，所述核苷酸序列如SEQ ID NO.10或SEQ ID NO.11所示。

9.一種可用于權利要求1所述的長鏈非編碼RNA序列RNAi用的短發(fā)夾片段，其特征在于，所述短發(fā)夾片段的核苷酸序列如SEQ ID NO.12或SEQ ID NO.13所示。

10.權利要求8所述的RNAi靶位點的核苷酸序列或權利要求9所述的RNAi用的短發(fā)夾片段在制備治療肺腺癌疾病的藥物中的用途。

11.包含權利要求1、8或9所述的核苷酸序列的載體。