[發明專利]一種含阿司匹林的甘草生根培養基篩選方法

在審

• 申請號: 201710171881.7
• 申請日: 2017-03-22
• 公開（公告）號: CN106614000A
• 公開（公告）日: 2017-05-10
• 發明（設計）人: 不公告發明人
• 申請（專利權）人: 陳志育
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 北京輕創知識產權代理有限公司11212
• 代理人: 談杰

技術領域

本發明屬于甘草組織培養技術領域，尤其涉及一種含阿司匹林的甘草生根培養基篩選方法。

背景技術

甘草，（學名：Glycyrrhiza uralensis Fisch）別名：國老、甜草、烏拉爾甘草、甜根子。豆科、甘草屬多年生草本，根與根狀莖粗壯，是一種補益中草藥。對人體很好的一種藥，藥用部位是根及根莖，藥材性狀根呈圓柱形，長25～100厘米，直徑0.6～3.5厘米。外皮松緊不一，表面紅棕色或灰棕色。根莖呈圓柱形，表面有芽痕，斷面中部有髓。氣微，味甜而特殊。功能主治清熱解毒、祛痰止咳、脘腹等。喜陰暗潮濕，日照長氣溫低的干燥氣候。甘草多生長在干旱、半干旱的荒漠草原、沙漠邊緣和黃土丘陵地帶。根和根狀莖供藥用。傳統的甘草獲取方法是采挖葉生植物資源，造成水土流失和嚴重土壤沙漠化。另外，甘草種子主要來自野生甘草，其品種混雜，種子稀缺，發芽率極低，野生資源不適應規?；蜆藴驶a的需要。同時由于人們破壞性地對葉生甘草采挖，使野生植物幾乎滅絕，對甘草的保護性利用迫在眉睫，但由于甘草種植發芽率不高和人們對其此生代謝物的需求，從而使甘草的組織培養對研究和生產具有重要作用，然而目前的培養基篩選方法都是以科研為目的的篩選方法，不能商業工廠化生產的需求。

稀土元素是17種特殊的元素的統稱，它的得名是因為瑞典科學家在提取稀土元素時應用了稀土化合物，所以得名稀土元素。然而稀土是歷史遺留下來的名稱，稀土是從18世紀末開始陸續發現，當時人們常把不溶于水的固體氧化物稱為土，例如，將氧化鋁稱為“陶土”，氧化鈣稱為”堿土“等。稀土一般是以氧化物狀態分離出來的，當時比較稀少，因而得名為稀土（Rare Earth，簡稱RE或R），然而經過大量的科學研究，在組織培養當中添加了稀土元素會大大地提高組織培養的質量。

鑭是一種金屬元素，原子序數57，原子量138.9055，元素名來源于希臘文，原意是“隱蔽”。銀灰色光澤，質地較軟，密度6.174g/cm3，熔點921℃，沸點3457℃；化學性質活潑，暴露于空氣中很快失去金屬光澤生成一層藍色的氧化膜，但是它并不能保護金屬，繼而進一步氧化生成白色的氧化物粉末。能和冷水緩慢作用，易溶于酸，可以多種非金屬反應。金屬鑭一般保存于礦物油或稀有氣體中。鑭在地殼中的含量為0.00183%，在稀土元素中含量僅次于鈰。

發明內容

基于現有技術中甘草的組培生根培養基的篩選方法中偏向于科研，不適合商業工廠化生產的問題，本發明提供一種含阿司匹林的甘草生根培養基篩選方法，其通過單一變量法對甘草叢生芽進行生根培養，分析統計出根率、出根數、根重量和整棵植株的重量，在評價當中結合出根率、根質量和整棵植株的重量，更加符合商業工廠化的生產的標準。

一種含阿司匹林的甘草生根培養基篩選方法，其包括以下步驟：

步驟S10確定初步篩選范圍，檢索查閱相關文獻資料，對比其他植物物種組培生根過程中添加稀土元素和生根劑的量并確定稀土元素和阿司匹林初步篩選范圍；

步驟S20選擇外植體，選擇健康、生長環境一致并且生長狀態相似的增殖叢生芽，將增殖叢生芽分開成單芽；

步驟S30對照培養，使用單一變量法配制不同濃度稀土元素和阿司匹林添加量的培養基，分別接種相同量的生根芽，并進行常規出根組織培養；

步驟S40記錄檢測參數，培養20天后統計每個稀土元素和阿司匹林濃度梯度中出根的存活生根芽的數量，并計算有效出根率；

步驟S50生長量計算，分別將相同濃度梯度的每個平行實驗組中的芽取出，用清水沖洗干凈，擦干表面水分后對整株植株進行稱重，再將根部切出，并對根部進行稱重，記錄重量；

步驟S60計算評估因數，將有效出根率乘以根重量的十分七和植株整體重量的十分之四的和，得出評估因數，對比不同濃度梯度的評估因數，挑選出數值最大的評估因數對應的稀土元素和阿司匹林濃度梯度；

步驟S70縮小篩選范圍，使用步驟S60中挑選出的濃度梯度范圍重復進行步驟S10-S60縮小篩選范圍或者確定最適濃度；

步驟S80反向篩選基礎培養基，使用步驟S70確定的最適濃度搭配不同基礎培養基，重復步驟S40和步驟S50，并使用步驟S60的計算方法計算評估因數，確定最適基礎培養基。

優選地，所述的步驟S30中配制不同濃度是設置5-15個濃度梯度。

優選地，所述的步驟S30中接種的培養基的數量為每個濃度梯度的培養基設置10-20組平行實驗組。

優選地，所述的稀土元素是鑭元素。

優選地，所述的步驟S70中重復的次數是2-3次。