[發明專利]一種具有抗腫瘤作用的毛菌素J及其制備方法與用途

有效

• 申請號: 201710169193.7
• 申請日: 2017-03-21
• 公開（公告）號: CN107226820B
• 公開（公告）日: 2019-08-30
• 發明（設計）人: 王富乾;張耕;程璐;蔣捷;馬浩然
• 申請（專利權）人: 武漢市中西醫結合醫院
• 主分類號: C07D519/00
• 分類號: C07D519/00;C12P17/18;A61P35/00;A61P35/02;C12R1/645
• 代理公司: 武漢開元知識產權代理有限公司 42104
• 代理人: 俞鴻

1.一種具有抗腫瘤作用的毛菌素J，其特征在于，該毛菌素J的結構式如下式(I)所示：

2.一種權利要求1所述具有抗腫瘤作用的毛菌素J的制備方法，其特征在于，包括如下步驟：將Chaetomium sp.YX-1菌種培養處理后接種到液體培養基中發酵處理，取發酵液依次過濾、菌絲提取、濾液萃取處理，合并菌絲提取物和濾液萃取物得總提取物，取總提取物經硅膠柱層析，利用二氯甲烷/甲醇梯度洗脫，對洗脫后含有多硫代二酮哌嗪類化合物特征吸收峰部分在LC-MS分析追蹤下依次經ODS柱層析、Sephadex LH-20凝膠柱色譜分離，對含有多硫代二酮哌嗪類化合物特征吸收峰部分，經過半制備液相純化得到結構式為I的化合物毛菌素J。

3.根據權利要求2所述具有抗腫瘤作用的毛菌素J的制備方法，其特征在于，所述液體培養基按質量百分數計包括酵母提取物0.2-0.5％、蛋白胨0.2-0.5％、葡萄糖0.6-1％，余量為水。

4.根據權利要求2所述具有抗腫瘤作用的毛菌素J的制備方法，其特征在于，所述培養處理具體為將Chaetomium sp.YX-1菌種接種于PDA培養基上3-7天后，切成0.5cm×0.5cm的碎片；所述發酵處理的溫度為22-32℃，發酵時間為15-45天。

5.根據權利要求2所述具有抗腫瘤作用的毛菌素J的制備方法，其特征在于，所述菌絲提取處理為采用質量百分數為90％的甲醇對發酵液過濾后的菌絲回流提取1-3次，得到菌絲提取物；所述濾液萃取處理為采用與發酵液過濾后的濾液等體積的乙酸乙酯萃取1-5次后，經減壓回收乙酸乙酯溶劑后得到濾液萃取物。

6.根據權利要求2所述具有抗腫瘤作用的毛菌素J的制備方法，其特征在于，所述硅膠柱層析利用二氯甲烷/甲醇進行洗脫，洗脫比例為50:1、30:1、15:1、8:1、4:1、2:1和1:1。

7.根據權利要求2所述具有抗腫瘤作用的毛菌素J的制備方法，其特征在于，所述ODS柱層析利用石油醚/乙酸乙酯進行洗脫，洗脫比例為50:1、30:1、15:1、8:1、4:1、2:1和1:1；所述Sephadex LH-20凝膠柱色譜分離利用體積比為1:1的二氯甲烷/甲醇進行等度洗脫。

8.根據權利要求2所述具有抗腫瘤作用的毛菌素J的制備方法，其特征在于，所述半制備液相色譜純化采用的流動相為體積比為75:25的甲醇和水，液相流速為2.0mL/min。

9.根據權利要求2所述具有抗腫瘤作用的毛菌素J的制備方法，其特征在于，具體包括如下步驟：

1)將Chaetomium sp.YX-1菌種接種于PDA培養基上3-7天后切成0.5cm×0.5cm的碎片，再接種到液體培養基中，在溫度為22-32℃的條件下發酵15-45天，取得發酵液；

2)將步驟1)所得的發酵液過濾后，采用質量百分數為90％的甲醇對發酵液過濾后的菌絲回流提取1-3次得到菌絲提取物，采用與發酵液過濾后的濾液等體積的乙酸乙酯萃取1-5次，經減壓回收乙酸乙酯溶劑后得到濾液萃取物，合并菌絲提取物和濾液萃取物得到總提取物；

3)將步驟2)所得的總提取物經硅膠柱層析，利用二氯甲烷/甲醇進行洗脫，洗脫液經過薄層色譜檢識后合并得到3-5個部分，各支部分經過LC-MS分析，僅其中一個部分含有多硫代二酮哌嗪類化合物特征峰；

4)將步驟3)含有多硫代二酮哌嗪類化合物特征峰的一個支部分在LC-MS分析追蹤下經ODS柱層析，利用石油醚/乙酸乙酯進行洗脫，洗脫液經過薄層色譜檢識后合并得到5～7個支部分，各支部分經過LC-MS分析，僅其中一個支部分含有多硫代二酮哌嗪類化合物特征峰；

5)選取步驟4)含有多硫代二酮哌嗪類化合物特征吸收峰的一個支部分在LC-MS分析追蹤下經Sephadex LH-20凝膠柱色譜分離，利用二氯甲烷/甲醇進行等度洗脫，洗脫液經過薄層色譜檢識后合并得到2～3個支部分，各支部分經過LC-MS分析，僅其中一個支部分含有多硫代二酮哌嗪類化合物特征峰；

6)將步驟5)含有多硫代二酮哌嗪類化合物特征峰的一個支部分經過半制備液相純化得到結構式為I的化合物毛菌素J。

10.一種權利要求1所述具有抗腫瘤作用的毛菌素J的用途，其特征在于，在制備用于治療白血病、肺癌、肝癌、乳腺癌、結腸癌藥物中的應用。