[發明專利]一種ASE?HPLC法測定骨碎補中柚皮苷含量的方法

在審

• 申請號: 201710168929.9
• 申請日: 2017-03-21
• 公開（公告）號: CN107064341A
• 公開（公告）日: 2017-08-18
• 發明（設計）人: 王麗麗;歐妮;廖強;陳學松
• 申請（專利權）人: 廣西壯族自治區梧州食品藥品檢驗所
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06
• 代理公司: 廣州市越秀區海心聯合專利代理事務所(普通合伙)44295
• 代理人: 黃為,蔡國

技術領域

本發明屬于化學檢測領域，尤其是一種ASE-HPLC法測定骨碎補中柚皮苷含量的方法。

背景技術

骨碎補，英文名：Drynaria fortunei。真蕨目、骨碎補科蕨類植物，全年均可采挖，除去泥沙，干燥，或再燎去茸毛(鱗片)，無臭，味淡，微澀。

骨碎補有療傷止痛、補腎強骨、外用消風祛斑的功效，可用于跌撲閃挫、筋骨折傷、腎虛腰痛、筋骨疹軟、耳鳴耳聾、牙齒松動、外治斑禿、白癱風等的治療。

現代藥理研究也表明骨碎補具有降血脂、降低胺基糖普類抗生素的毒性和促進骨吸收等作用。柚皮苷是骨碎補的主要有效成分之一，201 5年版《中國藥典》(一部)以柚皮苷作為其質量評價的指標。目前，骨碎補中柚皮苷的提取主要有煎煮法、加熱回流法、索氏提取法、超聲萃取法、微波輔助萃取法，測定方法有高效液相色譜法(HPLC)和薄層一紫外分光光度法，但是上述方法提取時間長、測定步驟煩瑣。

發明內容

針對上述不足，本發明旨在提供一種簡便、準確的ASE-HPLC法測定骨碎補中柚皮苷含量的方法。

為了解決上述技術問題，本發明提供的技術方案是這樣的：一種ASE-HPLC法測定骨碎補中柚皮苷含量的方法，依次包括下述步驟：

步驟1：采用ASE法萃取粉碎后的骨碎補樣品，并收集甲醇萃取液；

步驟2：采用HPLC法測定甲醇萃取液中柚皮苷的含量。

進一步的，所述的步驟1包括下述子步驟：

步驟S1：將骨碎補樣品粉碎，過三號篩，取過篩后的樣品粉末0.25g；

步驟S2：將樣品粉末與1g硅藻土混合，裝于放有纖維濾膜的ASE萃取池中，加硅藻土至與池口平行，用甲醇萃取；

步驟S3：收集萃取液，并使用甲醇定容至50ml。

進一步的，所述的步驟S2所述的萃取，參數如下：萃取池體積為10ml，萃取溫度為100℃，萃取時間為8min，萃取次數為3次，沖洗體積為60％，吹掃時間為60s。

進一步的，步驟2所述的HPLC法的檢測參數為：色譜柱為Thermo Syncronis Dim.AQ；柱溫為40℃；流速為0.3mL/min；流動相為甲醇-醋酸-水；檢測波長為283nm。

進一步的，所述的色譜柱的規格為1.7μm，50×2.1mm。

進一步的，所述的流動相為體積比為35:4:65的甲醇-醋酸-水。

進一步的，ASE法所采用的儀器為美國DIONEX公司的ASE350快速溶劑萃取儀；HPLC法所采用的儀器為Thermo U3000UHPLC液相色譜儀。

本發明與傳統方法相比，具有以下優勢：

本發明曾對快速溶劑萃取使用的溶劑進行考察，有論文提到使用60％乙醇提取柚皮苷相對含量較高，雜質較少，故對使用甲醇和60％乙醇進行了溶劑考察，結果顯示甲醇與60％乙醇提取柚皮苷含量一致，且雜質峰基本相同，故采用與藥典一致的提取溶劑。

由于有論文提到柚皮苷有論文提示不能回流太久，藥典回流6h比3h會更低，另外炮制中沙燙的時間和溫度也會對柚皮苷的含量有影響，故柚皮苷可能對熱不穩定，故要對萃取溫度要進行考察，且萃取時間也要考察，在上述實驗基礎上，我們采用3因素3水平正交實驗方案L9(33)安排實驗，考察了溫度、時間、次數3個因素對加速溶劑萃取骨碎補中柚皮苷過程的影響，確定從骨碎補中提取柚皮苷的最佳提取工藝組合為提取溫度100℃，提取時間8min，提取次數3次。

附圖說明

圖1為柚皮苷對照品圖譜圖；

圖2為快速溶劑萃取的樣品圖譜圖；

圖3為藥典方法提取的樣品圖譜圖；

圖4為柚皮苷以濃度(mg/ml)-峰面積進行線性回歸圖。

具體實施方式

下面結合具體實施方式，對本發明的權利要求做進一步的詳細說明，但不構成對本發明的任何限制，任何在本發明權利要求保護范圍內所做的有限次的修改，仍在本發明的權利要求保護范圍之內。

1、儀器設備及試劑

1.1儀器：

電子分析天平(XA205DU)、ASE350快速溶劑萃取儀(美國DIONEX公司)、Thermo U3000UHPLC液相色譜儀；

1.2試劑(除特別注明外，本實驗所用試劑均為分析純)：

水：符合GB/T 6682規定的一級水；

甲醇(CH₄O)：色譜純(液相色譜用)；

醋酸(CH₃COOH)：分析純。