[發明專利]一種基于液體活檢的非小細胞肺癌檢測的試劑盒

有效

• 申請號: 201710168577.7
• 申請日: 2017-03-21
• 公開（公告）號: CN106990080B
• 公開（公告）日: 2018-12-25
• 發明（設計）人: 張培培;段彪;陳昌岳;張祥林;馮麗娜;蔡紅東
• 申請（專利權）人: 上海美吉醫學檢驗有限公司
• 主分類號: G01N21/64
• 分類號: G01N21/64;G01N1/30
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發明提供了一種基于液體活檢的非小細胞肺癌檢測的試劑盒，包括：用于增強染色效果的染色增強液和帶熒光染色標記的特異性配體；其中所述特異性配體包括：EGFR抗體、CD45抗體和葉酸配體；所述染色增強液包括濃度為0.001～1mg/mL的表面活性劑。本發明的試劑盒，可以有效的富集目標細胞，并且確認富集的目標細胞是否來源于非小細胞肺癌的早期患者。同時，通過雙瘤標檢測增加CTC檢測的靈敏度，并且進一步通過CEP8的檢測保證檢測的準確性。而且通過染色增強液加強染色效果，使多種帶熒光染色標記的配體都可以與目標細胞表面結合，對目標細胞表面染色，染色效果更好，熒光更強，而且邊界清晰。

技術領域

本發明涉及液體活檢領域，具體地說是一種基于液體活檢的非小細胞肺癌檢測的試劑盒。

背景技術

肺癌是世界上最常見的惡性腫瘤之一,在我國其發病率和死亡率均位于首位。肺癌包括非小細胞肺癌(NSCLC)和小細胞肺癌(SCLC)，其中非小細胞肺癌包括鱗狀細胞癌(鱗癌)、腺癌、大細胞癌。與SCLC相比，雖然NSCLC細胞生長分裂較慢,擴散轉移相對較晚，但是因其約占所有肺癌的80％，而且約75％的患者發現時已處于中晚期，5年生存率很低，所以圍繞NSCLC的研究眾多，也得到了更多人的關注和重視。基于NSCLC的上述特點，其早期篩查與診斷顯得尤為重要，有效的早期篩查和診斷對于提高患者生存率和降低患者復發率都具有重要的作用。

目前，針對NSCLC的早期篩查，基于液體活檢檢測循環腫瘤細胞(CTC)的方法具有眾多傳統檢測方法所沒有的優勢，例如無創、快捷、準確率高等優點。CTC是一種自發或因診療操作由實體瘤原發灶或轉移灶釋放進入外周血循環的腫瘤細胞。由于轉移是癌癥相關死亡的主要原因，而CTC被視為轉移的種子，因此對CTC的檢測在新的腫瘤生物標志物的發現、腫瘤預后判斷及個體化治療領域存在很大的應用潛力，是國內外腫瘤研究的熱點之一。然而現有的CTC檢測的應用主要在檢測癌癥轉移復發上，對于癌癥的早期檢測研究較少。其實，CTC在癌癥的早期檢測中也具有重要價值，研究表明腫瘤在1mm時，血液中即可檢出CTC，通過檢測外周血循環中CTC的存在，可以在癌癥的早期發現癌癥。為此，有效的CTC捕獲、富集分析方法對于基于CTC的早篩很重要。

目前為止，基于EpCAM的CTC捕獲、富集分析平臺仍然被作為轉移腫瘤中CTC檢測的金標準，但是該方法是否適合用于腫瘤的早期檢測仍存在爭議。而且NSCLC患者的CTC往往表現出非上皮的特征，以廣譜的上皮粘附分子EpCAM為生物標志物對于非小細胞肺癌的CTC的檢測存在很高的假陰性，同時該標志物不具有組織特異性，無法追溯CTC的具體組織來源，而這一點對于后續的腫瘤治療具有重要意義。因此，發現并應用一些NSCLC組織特異性的生物標志物進行CTC的檢測分析顯得尤為重要。

葉酸受體(FR)雖然在很多腫瘤組織中都有表達，但是其在NSCLC中呈現出明顯的高表達，72-83％的NSCLC患者都表現為FR高表達，而它在正常組織表達量較低。因此，基于FR的CTC檢測具有很高的NSCLC早期診斷價值。此外，表皮生長因子受體(EGFR)也是一種重要的非小細胞肺癌預測標志物，其在轉移的NSCLC中陽性率為45-71％，而且在NSCLC中EGFR會發生過表達、拷貝數變異或活化突變，與NSCLC的耐藥性和預后關系密切，因此EGFR也被廣泛用做NSCLC診斷預測和預后的生物標志物。

據此，雖然FR或EGFR對于NSCLC來源的CTC的檢測率比較高，但是單獨使用FR或EGFR作為CTC檢測的標志物都會存在一定程度陰性率，造成漏檢。因此，可以聯合FR和EGFR兩種生物標志物作為檢測NSCLC的CTC早期篩查的生物標志物，不僅具有更高的靈敏性，而且還可以根據FR對CTC進行溯源分析。在對NSCLC做早期篩查的同時，還可以根據EGFR的狀態指導用藥并預測預后。