[發明專利]一種犬細小病毒VP2蛋白亞單位疫苗

在審

• 申請號: 201710168453.9
• 申請日: 2017-03-21
• 公開（公告）號: CN107007828A
• 公開（公告）日: 2017-08-04
• 發明（設計）人: 孫晨;蘇建東;楊保收
• 申請（專利權）人: 天津瑞普生物技術股份有限公司
• 主分類號: A61K39/23
• 分類號: A61K39/23;A61K38/21;A61K39/39;A61P31/20;A61P37/02
• 代理公司: 天津合志慧知識產權代理事務所(普通合伙)12219
• 代理人: 張勇

技術領域

本發明涉及亞單位疫苗技術領域，進一步涉及亞單位疫苗免疫效力的增進方法，具體涉及一種犬細小病毒VP2蛋白亞單位疫苗。

背景技術

犬細小病毒病是由犬細小病毒(Canineparvovirus，CPV)引起的一種具有高度接觸性的烈性傳染病，該病臨床上以劇烈的嘔吐、出血性腸炎和白細胞顯著減少為主要特征。感染犬是本病的主要傳染源，病毒隨糞便、尿液、嘔吐物及唾液排出體外。幼犬發病率和死亡率都很高，多發于3～6月幼齡犬。以其發病率高，傳染性強、死亡率高等特點使得該病成為危害我國養犬業最為嚴重的傳染病之一，既嚴重威脅著家養寵物的身體健康，又對當前我國養犬業、毛皮動物養殖業和野生動物保護業有較大的危害。

VP2蛋白是犬細小病毒的主要結構蛋白，約占總蛋白的90％。VP2蛋白是犬細小病毒主要的免疫保護性抗原，能誘導機體產生具有中和作用的抗體。因此，利用CPV的VP2基因構建基因疫苗免疫幼犬，可以誘導機體產生良好的細胞免疫應答，為基因工程苗的研制提供了可行性。目前，犬細小病毒VP2蛋白亞單位疫苗已經實現了商品化應用，然而在免疫效力方面仍有待提升。

α干擾素是一種具有多種生物活性的細胞因子。長期以來人們對α干擾素的了解是其強大的抗病毒功能，但對其免疫調節活性認識較少。然而，近年來的研究表明α干擾素調節著一些免疫細胞(T細胞、樹突狀細胞)的分化、存活及功能，顯著增強初次抗體反應。雖然現有技術對犬α干擾素研究較為深入，但其免疫調節作用能否與VP2蛋白的免疫原性形成協同作用以強化免疫效果，尚未得到有效認知。此外，α干擾素與VP2蛋白在免疫接種層面如何聯用才能起到更好的免疫保護效果也是亟待解決的技術問題。

發明內容

本發明旨在針對現有技術的技術缺陷，提供一種犬細小病毒VP2蛋白亞單位疫苗，以解決現有技術的犬細小病毒VP2蛋白亞單位疫苗免疫效力較低的技術問題。

為實現以上技術目的，本發明采用以下技術方案：

一種犬細小病毒VP2蛋白亞單位疫苗，所述疫苗中VP2蛋白含量為0.3～0.5mg/ml，所述疫苗中還含有0.6×10⁵～1×10⁵U/ml的犬α干擾素。

作為優選，所述VP2蛋白是通過以下方法制備的：擴增VP2蛋白表達基因，將其克隆至pMD18-T載體上，獲得重組克隆載體pMD18-T-VP2；而后將重組克隆載體pMD18-T-VP2導入原核表達載體pET-32a，表達產物，而后從中純化VP2蛋白。

作為優選，所述疫苗是利用鋁膠佐劑與含有VP2蛋白、犬α干擾素的生理鹽水按照1:4的體積比混合得到的。

作為優選，所述疫苗中VP2蛋白含量為0.4mg/ml。

作為優選，所述疫苗中犬α干擾素含量為0.8×10⁵U/ml。

本發明提供了一種犬細小病毒VP2蛋白亞單位疫苗，該技術方案在常規VP2蛋白亞單位疫苗的基礎上添加了適當水平的犬α干擾素，同時限定了蛋白含量與犬α干擾素間的比例關系。上述改進實現了α干擾素與VP2的聯合免疫，以α干擾素對免疫系統的誘導作用與VP2蛋白免疫原性相協同，提升了VP2蛋白亞單位疫苗的免疫效果。這種干擾素VP2亞單位疫苗既具有良好的廣譜抗病毒效果，有具有較強的免疫調節作用，即在抑制病毒增殖的同時，又可促進病毒特異性保護免疫的產生。

附圖說明

圖1是本發明實施例1中不同實驗組幼犬執行免疫接種后血清中抗體水平隨時間變化圖。

具體是實施方式

以下將對本發明的具體實施方式進行詳細描述。為了避免過多不必要的細節，在以下實施例中對屬于公知的結構或功能將不進行詳細描述。除有定義外，以下實施例中所用的技術和科學術語具有與本發明所屬領域技術人員普遍理解的相同含義。

以下實施例中所用的試驗試劑耗材，如無特殊說明，均為常規生化試劑；所述實驗方法，如無特殊說明，均為常規方法；以下實施例中的定量試驗，均設置三次重復實驗，結果取平均值；以下實施例中的％，如無特別說明，均為質量百分含量。

實施例1

1、VP2蛋白的制備：

利用GenBank中的犬細小病毒毒株VP2基因，設計了一對特異性游引物，擴增出目的片段。將此片段克隆至pMD18-T載體上，獲得重組克隆載體pMD18-T-VP2。再將重組克隆載體上的VP2基因亞克隆至原核表達載體pET-32a上，得到的重組表達載體pET-32a-VP2，表達產物經純化檢測后即得VP2蛋白。

2、VP2蛋白亞單位疫苗的制備：