[發明專利]培養基、培養基組合物及其制備方法

在審

• 申請號: 201710168051.9
• 申請日: 2017-03-20
• 公開（公告）號: CN107354095A
• 公開（公告）日: 2017-11-17
• 發明（設計）人: 厲剛
• 申請（專利權）人: 北京君立康生物科技有限公司
• 主分類號: C12N1/00
• 分類號: C12N1/00
• 代理公司: 中科專利商標代理有限責任公司11021
• 代理人: 任巖

技術領域

本發明涉及微生物技術領域，更具體地涉及一種培養基、培養基組合物及其制備方法。

背景技術

培養基(culture medium)是人工配制的，適合微生物生長、分離鑒別的營養基礎。一般基礎培養基中含有蛋白胨、牛肉浸粉、酵母浸粉、氯化鈉、瓊脂等基本營養物質。在臨床及食品衛生檢驗所用的培養基中，還經常需要添加抑菌劑、指示劑、血液、糖類等組分，以利于特定細菌的分離與鑒別，而病毒培養和疫苗生產中所用的培養基，則需要添加不同種類的氨基酸、核苷酸、無機鹽、生長因子等物質。培養基組分的復雜性及添加物穩定性的不同，直接決定了培養基的配置工藝和添加流程，實際工作中需針對性控制。

培養基作為微生物研究的基礎原料，在使用時應達到如下狀態：

(1)完全無菌狀態；

(2)培養基中各組分均衡有效，制備過程中培養基組分無損失及變性；

(3)制備時間短，以保證接種時待檢樣品中微生物的活性，尤其是臨床樣本和厭氧菌。

固體/半固體培養基是微生物研究過程中最常使用的一種培養基，其成分特征的共性是含有瓊脂成分作為凝固時的結構支撐組分。瓊脂凝膠的融點約為90～95℃，而凝固點為40～45℃，這一特性決定了瓊脂能夠作為微生物培養基的凝固劑，在較低溫度下將培養基制備成所需形狀。在一種叫做傾注培養的微生物培養方法中，需要先將含有微生物的樣品與培養基進行混合，將微生物包埋于培養基內，瓊脂的低溫凝固特性不會對微生物產生傷害。

實驗室中即配即用的方式并不利于久存，因此如今培養基市場供應的主要方式是出現于1917年的干粉式培養基，目前市售的干粉培養基已有400多個品種，由于各個品種的組分不同，配置過程復雜，各組分添加的流程不易掌握，在實際工作中容易產生失誤而導致實驗失敗。

此外，目前主流的以干粉模式配制的固體、半固體培養基還有以下不足：

(1)配制周期長，工作量大。

以干粉培養基配制固體或半固體培養基的流程如下：

干粉稱量→配制→調節pH值→高壓滅菌→冷卻至50～55℃→加入添加劑混勻待用。整個操作過程用時約兩至三小時，操作繁瑣，造成人力資源的浪費。

(2)干粉培養基的組分均衡度往往不夠理想。

培養基的組分十分復雜，部分添加組分是微量的，以干粉形式供應過程中，常常因混合不均勻或運輸過程中的分層現象導致生產出的成品培養基成分不夠均衡。

以腸桿菌分離鑒別培養基中最為常用的沙門志賀氏菌瓊脂(SS瓊脂)為例，其組分如下：

試想將0.025克中性紅組分及0.00033克煌綠組分均勻混合于60克其它物料當中，其難度可想而知。

(3)配制過程往往需要通過降低滅菌溫度或減少滅菌時間來保護部分成分的穩定性和有效性，因而導致產品污染幾率增加。

例如亞硫酸鉍瓊脂，由于亞硫酸鉍高溫下不穩定，無法采用高壓滅菌處理，只能通過煮沸殺滅微生物繁殖體，而在煮沸的狀態下，真菌孢子和細菌的芽孢是無法被殺滅的。

(4)由于瓊脂的溶解溫度約為90～95℃，培養基液化后的可使用溫度通常為50℃，配制后需要的降溫時間長。

發明內容

有鑒于此，本發明的主要目的在于提供一種培養基、培養基組合物及其制備方法，以期解決上述技術問題中的至少之一。

為了實現上述技術目的，作為本發明的一個方面，本發明提供了一種培養基組合物，包括：

第一組分，為所述培養基組合物中的結構支撐組分，所述第一組分為凝膠或干粉；所述第一組分滅菌后單獨封裝，或單獨分裝后高溫滅菌；

第二組分，為所述培養基組合物中除了第一組分、對常溫、光照或溶液不穩定的組分、或完整的動物活細胞、或高溫高壓滅菌時會發生變性的組分之外的其余組分；所述第二組分滅菌后單獨封裝，或單獨分裝后高溫高壓滅菌。

作為本發明的另一個方面，本發明還提供了一種培養基組合物的制備方法，包括以下步驟：

將培養基中的結構支承組分制成干粉或加水配制成凝膠，滅菌后單獨封裝或單獨分裝后高溫滅菌，得到所述培養基組合物的第一組分；

將所述培養基中除了第一組分，以及常溫、光照或溶液狀態下不穩定的組分、或完整的動物活細胞、或高溫高壓滅菌時會發生變性的組分之外的其余組分混合配制成干粉或濃縮液，滅菌后單獨封裝或單獨分裝后高溫高壓滅菌，得到所述培養基組合物的第二組分；

其中，上述兩個步驟不分先后順序，由此得到所述培養基組合物獨立封裝的兩個組分。