[發明專利]一種PAEs降解菌的固定化微球及其制備方法和應用

有效

• 申請號: 201710167589.8
• 申請日: 2017-03-21
• 公開（公告）號: CN106834269B
• 公開（公告）日: 2019-11-05
• 發明（設計）人: 周震峰;饒瀟瀟;王亞娟
• 申請（專利權）人: 青島農業大學;寧夏大學
• 主分類號: C12N11/14
• 分類號: C12N11/14;C12N11/10;C12N11/04;B09C1/10;C12R1/40
• 代理公司: 青島中天匯智知識產權代理有限公司 37241
• 代理人: 趙翠

1.一種PAEs降解菌的固定化微球的制備方法，其特征在于，具體步驟如下：

(1)菌懸液的制備：將PAEs降解菌培養至對數生長期，用生理鹽水將菌體洗凈后，再用生理鹽水將菌體調配成菌懸液，使菌懸液的OD₆₀₀＝0.8-1.2；所述PAEs降解菌為惡臭假單胞菌(Pseudomonas putida)RXX-01，已保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏日期為2016年11月1日，保藏編號為CGMCC No.13224；所述生理鹽水為滅菌的0.9％NaCl溶液；

(2)混合菌液的配備：用無菌水配制海藻酸鈉溶液，將活性炭加入到海藻酸鈉溶液中混勻得混合液，向混合液中加入步驟(1)的菌懸液混勻得混合菌液；各組份所占重量比分別為：菌懸液15-25％，海藻酸鈉2-3％，活性炭2-4％；

(3)固定化微球的制備：用無菌水配制20-30g/L的氯化鈣溶液，并將混合菌液逐滴滴入氯化鈣溶液中，交聯20-30h后制備得到固定化微球；混合菌液與氯化鈣溶液的體積比為1:1.5～1:2。

2.根據權利要求1所述的PAEs降解菌的固定化微球的制備方法，其特征在于，混合菌液各組份所占重量比分別為：菌懸液20％，海藻酸鈉3％，活性炭2％；用于制備固定化微球的氯化鈣溶液的濃度為25g/L。

3.根據權利要求1所述的PAEs降解菌的固定化微球的制備方法，其特征在于，所述步驟(1)中惡臭假單胞菌RXX-01的培養基為牛肉膏蛋白胨培養基，組份為：牛肉膏3g，蛋白胨10g，氯化鈉5g，加水定容至1000mL。

4.根據權利要求1所述的PAEs降解菌的固定化微球的制備方法，其特征在于，所述步驟(1)中惡臭假單胞菌RXX-01的培養條件為：25-30℃、pH6.5-7.5、150-200r/min恒溫震蕩培養24-72h。

5.根據權利要求1所述的PAEs降解菌的固定化微球的制備方法，其特征在于，所述步驟(1)中清洗菌體的方法為：將惡臭假單胞菌RXX-01的培養液于3500-4500rpm離心5-15min，棄上清液，用滅菌的生理鹽水重懸沉淀后，重復離心及重懸沉淀的步驟1-3次。

6.根據權利要求1所述的PAEs降解菌的固定化微球的制備方法，其特征在于，所述步驟(3)中采用蠕動泵將混合菌液滴入氯化鈣溶液中，流量控制在6mL/min。

7.根據權利要求1所述的PAEs降解菌的固定化微球的制備方法，其特征在于，所述步驟(3)制備好的固定化微球用無菌蒸餾水沖洗干凈，4℃保存。

8.權利要求1-7任一所述方法制備得到的PAEs降解菌的固定化微球。

9.權利要求8所述PAEs降解菌的固定化微球在降解農田土壤鄰苯二甲酸酯中的應用。

10.根據權利要求9所述的PAEs降解菌的固定化微球的應用，其特征在于，所述PAEs降解菌的固定化微球在降解農田土壤中鄰苯二甲酸酯時的用量為0.1-1kg/kg干土。