[發明專利]一種轉基因大豆檢測用多重PCR試劑盒及檢測方法

有效

• 申請號: 201710167334.1
• 申請日: 2017-03-20
• 公開（公告）號: CN106995841B
• 公開（公告）日: 2020-10-09
• 發明（設計）人: 孫萬平;沈蘇南;王曉囡;季建剛;張麗君;薛滿
• 申請（專利權）人: 蘇州大學
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12Q1/686;C12N15/11
• 代理公司: 蘇州創元專利商標事務所有限公司 32103
• 代理人: 陶海鋒;孫周強

本發明公開了一種轉基因大豆檢測用多重PCR試劑盒及檢測方法，可快速檢測我國農業部批準進口的12種轉基因大豆，包括MON87701、GTS40?3?2、MON89788、CV127、A2704、A5547、DP356043、DP305423、MON87769、MON87708、305423×40?3?2、MON87701×MON89788；本發明公開的多重PCR試劑盒基于“公共引物”介導的多重PCR方法，包括公共引物、多重引物、多重PCR體系檢測；兩步退火溫度法提高多重PCR體系的特異性、敏感性，該多重PCR方法具有包容性，可繼續增加檢測靶標，有利于提高多重PCR的檢測通量。本發明具有靈敏度高，經濟、快速、操作簡單等優點，可應用于食品檢測。

技術領域

本發明屬于食品/基因檢測領域，具體涉及轉基因大豆檢測用多重PCR試劑盒及檢測方法。

背景技術

目前，國內外報道的轉基因作物檢測技術主要分為三類，一類是基于核酸的檢測技術；二是基于蛋白質的酶學和免疫學檢測技術；第三類是轉基因檢測新技術，包括向自動化技術發展的生物傳感器與生物芯片、基于現代分析儀器的近紅外光譜和質譜分析技術等。第二類基于蛋白質的檢測技術是對轉基因植物中外源基因表達的蛋白進行檢測，這些蛋白在加工過程中易受到破壞而失活、分解或消失，檢查結果易出現假陰性且方法的重復性差。近些年發展的轉基因檢測新技術如生物傳感器、色譜法和近紅外光譜法等，此類技術目前仍處于研究階段，存在一些暫時無法有效解決或客觀存在的缺點，如色譜法只適用于轉基因植物及其產品的成分發生重大變化時的定性檢測分析，該類檢測技術短期內仍無法有效推廣應用。因此，我國農業部發布的轉基因成分檢測方法標準以核酸檢測技術為主，該類檢測技術包括PCR技術、恒溫擴增技術、southern雜交、基因芯片技術、熒光定量PCR等。

多重PCR是在普通PCR的基礎上，于同一個反應體系中利用多對引物同時擴增多段靶序列的PCR技術。自多重PCR報道以來，由于其高效性、靈敏性和經濟簡便性，已廣泛應用于核酸診斷的多個領域，如遺傳疾病診斷、突變和多態性分析、病原體檢測、轉基因鑒定等；多重PCR體系，一般包括以下試劑：PCR緩沖液、Taq酶、dNTP、MgCl₂、多重引物、模板和去離子水。

我國目前允許進口的轉基因大豆高達12種（具體包括GTS-40-3-2、MON87701、MON89788、MON87701×MON89788、CV127-9、A2704-12、DP356043、DP305423、A5547、305423×40-3-2、MON87769、MON87708，其中MON87701×MON89788和305423×40-3-2為復合性狀轉基因大豆）。

轉基因作物是利用基因工程技術將外源目的基因轉入植物中培育而出的，它們具有抗蟲、抗除草劑、抗逆和營養改良等優良特性。全球轉基因作物的種植面積自1996年的0.17億公頃增加到2015年的1.797億公頃。隨著轉基因技術不斷發展，轉基因作物產業化與商業化的程度不斷加深，我國陸續針對轉基因作物制定了相關法律法規，然而，公眾對轉基因食品安全的擔憂及對所食用食品是否含有轉基因成分的知情權仍與日俱增，因此，快速、準確、敏感的轉基因食品檢測技術是所有轉基因安全性評價等法律法規真正落到實處的基礎和關鍵之一。

發明內容

本發明的目的是提供一種檢測轉基因大豆的多重PCR試劑盒，用于我國目前批準進口（即已頒發安全證書）的12種轉基因大豆的單一或者同時多重PCR檢測，通過設計公共引物及轉基因大豆特異性引物，限定多重PCR檢測體系和條件，可檢測食品（比如大豆、大豆制品、含有大豆成份的食物等）中是否含有轉基因大豆成分。

為達到上述發明目的，本發明采用的技術方案是：

一種轉基因大豆檢測用多重PCR試劑盒，包括公共引物、針對轉基因大豆的嵌合引物；所述公共引物的序列為SEQ ID NO.1；所述針對轉基因大豆的嵌合引物為SEQ ID NO.2至SEQ ID NO.18所示的核苷酸序列中的一種或幾種。