[發(fā)明專利]一種山楂葉中黃酮單體的制備方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201710165422.8
• 申請日: 2017-03-20
• 公開（公告）號: CN106831892B
• 公開（公告）日: 2020-05-15
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 王岱杰;王曉;郭蘭萍;時新剛;王濤;林云良;高紅梅
• 申請（專利權(quán)）人: 山東省分析測試中心
• 主分類號: C07H1/08
• 分類號: C07H1/08;C07H17/07;C07D311/62;A61K31/7048;A61P3/06;A61K31/353;A61P9/10;A61P3/10;A61P29/00
• 代理公司: 濟(jì)南圣達(dá)知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 37221
• 代理人: 張曉鵬

本發(fā)明公開了一種山楂葉中黃酮單體的制備方法，其解決了現(xiàn)有技術(shù)中山楂葉中黃酮類單體制備效率低、成本高、制備量小的問題，具有操作簡便，效率高，成本低，制備的黃酮單體純度高的效果。其技術(shù)方案為：包括如下步驟：1)將山楂葉粉碎、提取、富集、蒸干，制得山楂葉總黃酮樣品；2)應(yīng)用高速逆流色譜法將樣品中的槲皮素?3?O?(2,6?di?α?L?吡喃鼠李糖基)?β?D?半乳糖苷，4″?O?牡荊素葡糖苷、異槲皮苷和(2R,3R)?3,5,7,3',5'?五羥基黃烷進(jìn)行分離純化；溶劑系統(tǒng)為氯仿：甲醇：水：正丁醇＝3.5?4.5:2.5?3.5:1.5?2.5:1?2，v/v。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于中藥有效成分的高效制備技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種山楂葉中黃酮單體的制備方法。

技術(shù)背景

山楂葉(Crataegi Folium)為薔薇科(Rosaceae)植物山里紅(Crataeguspinnatifida Bge.Var.major N.E.Br.)或山楂(Crataegus pinnatifida Bge.)的干燥葉，具有活血化瘀，理氣通脈，化濁降脂等多種功效，在我國山東、陜西、山西等地均廣泛分布。山楂葉作為山楂果實的副產(chǎn)物，資源豐富、產(chǎn)量高，具有廣泛的開發(fā)價值。現(xiàn)代藥理研究表明山楂葉具有降血脂、抗心肌缺血缺氧、防治糖尿病、抗炎和鎮(zhèn)痛等多種藥理活性。并且已廣泛的應(yīng)用于山玫膠囊、益心酮片等多味中藥中。傳統(tǒng)的山楂葉中黃酮類化合物的分離方法為聚酰胺色譜、硅膠柱色譜和Sephadex LH-20等制備方法，其局限性是費(fèi)時費(fèi)力、污染環(huán)境、樣品純度低，而且反復(fù)柱層析對樣品有不可逆性吸附作用，分離得到黃酮類化合物單體制備效率低、成本較高，難以發(fā)展成為制備量大的分離技術(shù)。

高速逆流色譜(High-speed Counter-current Chromatography，HSCCC)是近30年發(fā)展起來的一種連續(xù)的無需任何固體支持物的高效、快速的液-液分配色譜分離技術(shù)，它避免了固態(tài)支持體或載體帶來的樣品易被死吸附、損耗和變性等各種問題，使用其它液相色譜法進(jìn)行制備型分離時，其分配效率會顯著降低，溶劑消耗量大，HSCCC保證較高峰型分辨度，分離量大、樣品無損失、回收率高、分離環(huán)境緩和，節(jié)約溶劑。高速逆流色譜能直接進(jìn)大量粗提樣品或合成混合物，分離結(jié)果能達(dá)到相當(dāng)高的純度，已廣泛應(yīng)用于生物、醫(yī)藥、環(huán)保等領(lǐng)域化學(xué)物質(zhì)的制備分離和純化。但是溶劑系統(tǒng)的選擇對于HSCCC分離效果十分關(guān)鍵，而到目前為止，溶劑系統(tǒng)的選擇還沒有充分的理論依據(jù)，而是根據(jù)操作人員積累的豐富經(jīng)驗來選擇，如根據(jù)實際情況，總結(jié)分析并參照相關(guān)的專著及文獻(xiàn)，從所需分離的物質(zhì)的類別出發(fā)尋找相似的分離實例，選擇極性適合的溶劑系統(tǒng)。如果遇到待分離純化的物質(zhì)種類較多時，而且沒有與待分離的物質(zhì)的極性相似的分離實例時，則難以確定溶劑系統(tǒng)，更無法對溶劑系統(tǒng)中的各種溶劑的比例進(jìn)行調(diào)節(jié)，難以實現(xiàn)待分離物質(zhì)的分離。

發(fā)明內(nèi)容

針對上述現(xiàn)有技術(shù)中存在的技術(shù)問題，本發(fā)明提供了一種山楂葉中黃酮單體的制備方法，包括如下步驟：

1)將山楂葉粉碎、提取、富集、蒸干，制得山楂葉總黃酮樣品；

2)應(yīng)用高速逆流色譜法將樣品中的槲皮素-3-O-(2,6-di-α-L-吡喃鼠李糖基)-β-D-半乳糖苷，4”-O-牡荊素葡糖苷、異槲皮苷和(2R,3R)-3,5,7,3',5'-五羥基黃烷進(jìn)行分離純化；

溶劑系統(tǒng)為氯仿：甲醇：水：正丁醇＝3.5-4.5:2.5-3.5:1.5-2.5:1-2(v/v)。

本發(fā)明中將提取得到的總黃酮樣品經(jīng)特定溶劑系統(tǒng)的高速逆流色譜分離純化，得到純度大于98％的槲皮素-3-O-(2,6-di-α-L-吡喃鼠李糖基)-β-D-半乳糖苷，4”-O-牡荊素葡糖苷、異槲皮苷和(2R,3R)-3,5,7,3',5'-五羥基黃烷。該方法成本低，操作簡便，效率高，可以大批量分離制備高純度山楂葉黃酮單體化合物。

進(jìn)一步的，步驟1)中，所述提取是將一定質(zhì)量的山楂葉粉末用7-9倍量的50-95％乙醇加熱回流提取，得提取液。