[發(fā)明專利]一種用于沙冬青鑒定的微衛(wèi)星分子標記、試劑盒及其應用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201710165417.7
• 申請日: 2017-03-20
• 公開（公告）號: CN106636453B
• 公開（公告）日: 2020-05-12
• 發(fā)明（設計）人: 路戰(zhàn)遠;智穎飆;程玉臣;張德健;王建國;葉雪松;張向前;咸豐
• 申請（專利權）人: 內蒙古自治區(qū)農牧業(yè)科學院
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12N15/11
• 代理公司: 北京高沃律師事務所 11569
• 代理人: 王加貴

本發(fā)明提供了用于鑒定沙冬青的微衛(wèi)星分子標記，包括AM?4，所述AM?4的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。本發(fā)明還提供了一種用于鑒定沙冬青微衛(wèi)星分子標記的試劑盒，包括所述用于鑒定沙冬青的微衛(wèi)星分子標記對應的引物對。本發(fā)明提供的用于鑒定沙冬青的微衛(wèi)星分子標記以及用于鑒定沙冬青的試劑盒能夠有效的鑒別沙冬青。本發(fā)明提供的用于鑒定沙冬青的微衛(wèi)星分子標記還能夠為沙冬青種質資源的遺傳多樣性調查、種群遺傳結構分析、個體識別以及親緣關系鑒定提供支持。

技術領域

本發(fā)明涉及分子生物學DNA標記技術與應用領域，具體涉及一種用于沙鑒定冬青及遺傳學分析的微衛(wèi)星分子標記、試劑盒及其應用。

背景技術

沙冬青(Ammopiptanthus mongolicus)，屬于豆科沙冬青屬又稱蒙古黃花木、冬青、蒙古沙冬青，分布于內蒙古、寧夏和甘肅等地海拔1000至1200米低山地帶，是我國北方荒漠地區(qū)唯一的強旱生常綠闊葉灌木，因為具有極強的抗逆性，沙冬青是極其珍貴的荒漠地區(qū)種質資源。沙冬青物種歷史久遠，是古地中海退縮、氣候旱化過程中幸存的孑遺種之一。在研究第三紀氣候特征、地理環(huán)境變遷、亞洲中部荒漠植被的起源和形成等方面有重要的研究價值。

由于分布范圍狹小，生境嚴酷，又受到人類活動的影響，沙冬青數(shù)量正不斷減少，現(xiàn)已瀕臨滅絕，被列為國家二級保護植物。在阻止盜采和人為破壞等事件中，快速而準確的物種鑒定和個體識別手段是十分必要的。另外，為了制定合理的保護管理方法及輔助育種，也亟需對沙冬青開展種質資源遺傳多樣性、種群結構、種群歷史動態(tài)等遺傳學分析研究。

微衛(wèi)星DNA(Microsatellite DNA)，也稱為簡單重復序列(Simple SequenceRepeats,SSR)，廣泛分布于真核生物的基因組中，是一類由幾個核苷酸(一般為2-6個)為重復單位組成的串聯(lián)重復序列。由于其有數(shù)量多、特異的PCR擴增、穩(wěn)定性好、在基因組內分布均勻、多態(tài)性信息豐富、易于檢測等特性等諸多優(yōu)點成為近年來應用廣泛的分子標記之一。微衛(wèi)星分子標記也成功和廣泛得應用于物種鑒定和遺傳學研究中。

發(fā)明內容

有鑒于此，本發(fā)明的目的在于提供一組用于沙冬青鑒定的微衛(wèi)星分子標記。

為了實現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明提供以下技術方案：

本發(fā)明提供了用于鑒定沙冬青的微衛(wèi)星分子標記，包括AM-4，所述AM-4的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

優(yōu)選的，所述微衛(wèi)星分子標記還包括AM-6、AM-7、AM-8、AM-10、AM-15、AM-16、AM-17、AM-19和AM-20中的一種或幾種，上述核苷酸序列分別如SEQ ID NO.2～10所示。

本發(fā)明提供了一種用于鑒定沙冬青的試劑盒，包括根據(jù)上述技術方案所述微衛(wèi)星分子標記設計得到的濃度為10μM的引物對各1μL，2×Taq PCR SuperMix 15μL，DNA模板1μL，用超純水補齊至30μL；

所述引物對包括：

AM-4引物對序列如SEQ ID NO.11和SEQ ID NO.12所示。

優(yōu)選的，所述試劑盒還包括以下引物對中的一對或多對：

AM-6引物對序列如SEQ ID NO.13和SEQ ID NO.14所示；

AM-7引物對序列如SEQ ID NO.15和SEQ ID NO.16所示；

AM-8引物對序列如SEQ ID NO.17和SEQ ID NO.18所示；

AM-10引物對序列如SEQ ID NO.19和SEQ ID NO.20所示；

AM-15引物對序列如SEQ ID NO.21和SEQ ID NO.22所示；