[發(fā)明專(zhuān)利]一株6-芐氨基腺嘌呤單克隆抗體雜交瘤細(xì)胞株ZXL-3及其應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201710164476.2
• 申請(qǐng)日: 2017-03-20
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN106987563B
• 公開(kāi)（公告）日: 2019-07-02
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 胥傳來(lái);李月;匡華;徐麗廣;馬偉;劉麗強(qiáng);吳曉玲;宋珊珊;胡擁明
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 江南大學(xué)
• 主分類(lèi)號(hào): C12N5/20
• 分類(lèi)號(hào): C12N5/20;C07K16/44;G01N33/577
• 代理公司: 無(wú)錫市大為專(zhuān)利商標(biāo)事務(wù)所(普通合伙) 32104
• 代理人: 時(shí)旭丹;張仕婷

一株6?芐氨基腺嘌呤單克隆抗體雜交瘤細(xì)胞株ZXL?3及其應(yīng)用，屬于食品安全免疫檢測(cè)領(lǐng)域。本發(fā)明雜交瘤細(xì)胞株ZXL?3已保藏于中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心，簡(jiǎn)稱(chēng)CGMCC，保藏編號(hào)為CGMCC No.13084。此細(xì)胞株分泌的單克隆抗體，對(duì)6?芐氨基腺嘌呤具有較好的特異性和檢測(cè)靈敏度，IC₅₀為2.5 ng/mL，可實(shí)現(xiàn)對(duì)水果、蔬菜中6?芐氨基腺嘌呤殘留量的檢測(cè)，為食品中6?芐氨基腺嘌呤殘留的免疫檢測(cè)提供了原料，具有實(shí)際應(yīng)用價(jià)值。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一株6-芐氨基腺嘌呤單克隆抗體雜交瘤細(xì)胞株ZXL-3及其應(yīng)用，屬于食品安全免疫檢測(cè)領(lǐng)域。

背景技術(shù)

6-芐氨基腺嘌呤（6-Benzylaminopurine，6-BA）是一種人工合成的植物生長(zhǎng)激素，主要作為促長(zhǎng)劑和保鮮劑使用。它能夠促進(jìn)與調(diào)節(jié)植物生長(zhǎng)發(fā)育以及蔬菜、水果的保鮮和儲(chǔ)存。6-BA是第一個(gè)人工合成的細(xì)胞分裂素，主要成份是嘌呤類(lèi)生物堿和一些無(wú)機(jī)物，在細(xì)胞分裂素中具有較高活性。6-BA作為植物促長(zhǎng)劑和果蔬保鮮劑的主要成分，已在國(guó)內(nèi)外進(jìn)入應(yīng)用階段。作為植物促長(zhǎng)劑使用，可以提高種子發(fā)芽率，促進(jìn)幼苗生長(zhǎng)，最終提高產(chǎn)率，常被用于促進(jìn)豆芽的生長(zhǎng)，提高煙葉的產(chǎn)量等。在作物生長(zhǎng)過(guò)程中，6-BA能夠起到將氨基酸生長(zhǎng)素、無(wú)機(jī)鹽等向植物的莖、根等部位輸運(yùn)的作用，改善其生長(zhǎng)。另外6-BA還能夠通過(guò)抑制植物內(nèi)的葉綠素、核酸、蛋白質(zhì)分解、抑制呼吸等方式對(duì)作物防衰保鮮，因此6-BA適用于各種綠葉蔬菜（如青椒、黃瓜、豆角等）貯藏前使用。

6-芐氨基腺嘌呤已被廣泛應(yīng)用于農(nóng)業(yè)、果樹(shù)栽培和園藝等領(lǐng)域。因此 6-BA 在市售水果和蔬菜中一般都有一定的殘留，而人體攝入6-BA過(guò)多會(huì)刺激食道、胃黏膜，造成食道、胃黏膜損傷，出現(xiàn)惡心、嘔吐等現(xiàn)象。國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) GB2760-1996 將6-芐氨基腺嘌呤（6-BA）作為允許使用的食品添加劑，同時(shí)也規(guī)定了其最高允許使用限量（0.01 g/kg）和最高允許殘留量（0.20 mg/kg）。然而，目前一方面國(guó)內(nèi)外至今尚未建立6-芐氨基腺嘌呤進(jìn)出口產(chǎn)品質(zhì)量的檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)及其測(cè)定方法，這給6-BA的生產(chǎn)使用和進(jìn)出口貿(mào)易以及食品衛(wèi)生監(jiān)督與監(jiān)測(cè)工作帶來(lái)很大的阻礙；另一方面食品中6-BA殘留量的檢測(cè)方法也沒(méi)有國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)。為了維護(hù)廣大消費(fèi)者的利益，有必要建立一種針對(duì)6-BA的高效、快速的檢測(cè)方法，而酶聯(lián)免疫法（ELISA）前處理簡(jiǎn)單，成本低，可實(shí)現(xiàn)大量樣品的快速檢測(cè)，且檢測(cè)時(shí)對(duì)樣本的純度要求不高。因此，建立高效的免疫學(xué)檢測(cè)方法很有必要，而建立此方法的一個(gè)重要前提即需篩選出針對(duì)6-芐氨基腺嘌呤的高特異性單克隆抗體。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供一株6-芐氨基腺嘌呤單克隆抗體雜交瘤細(xì)胞株ZXL-3，由該細(xì)胞株制備的抗體對(duì)6-芐氨基腺嘌呤具有較好特異性和檢測(cè)靈敏度，可以用來(lái)建立6-芐氨基腺嘌呤的免疫學(xué)檢測(cè)方法。

本發(fā)明的技術(shù)方案，一株6-芐氨基腺嘌呤單克隆抗體雜交瘤細(xì)胞株ZXL-3，已保藏于中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心，簡(jiǎn)稱(chēng)CGMCC，保藏編號(hào)為CGMCCNo.13084。

6-芐氨基腺嘌呤單克隆抗體，它由所述保藏編號(hào)為CGMCC No. 13084的6-芐氨基腺嘌呤單克隆抗體雜交瘤細(xì)胞株ZXL-3分泌產(chǎn)生。

所述6-芐氨基腺嘌呤單克隆抗體的應(yīng)用，用于食品安全檢測(cè)中6-芐氨基腺嘌呤殘留的分析檢測(cè)。

本發(fā)明提供的6-芐氨基腺嘌呤單克隆抗體雜交瘤細(xì)胞株ZXL-3的制備基本步驟為：

（1）半抗原的衍生：

原藥 Mol. Wt：225.249

半抗原：用6-氯嘌呤和4-（氨甲基）苯甲酸取代得到：