[發明專利]一種同步分離高純度植物葉綠體和線粒體的方法有效
| 申請號： | 201710164468.8 | 申請日： | 2017-03-17 |
| 公開（公告）號： | CN106947729B | 公開（公告）日： | 2019-10-08 |
| 發明（設計）人： | 華瑋;李俊;范世航;劉紅芳 | 申請（專利權）人： | 中國農業科學院油料作物研究所 |
| 主分類號： | C12N5/04 | 分類號： | C12N5/04 |
| 代理公司： | 武漢宇晨專利事務所 42001 | 代理人： | 王敏鋒 |
| 地址： | 430062 湖*** | 國省代碼： | 湖北;42 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 同步 分離 純度 植物 葉綠體 線粒體 方法 | ||
【權利要求書】：
1.一種同步分離高純度植物葉綠體和線粒體的方法，其步驟是：
A. 植物葉片組織沖洗干凈并剪碎，按照葉片組織的質量與CIB緩沖液的體積比m: v為1: 15加入CIB緩沖液，研磨后依次通過70 μm、35 μm和15 μm濾網過濾，過濾液200×g離心5min，去除組織殘渣、細胞碎片；
B. 根據葉綠體和線粒體不同的沉降系數，將步驟A獲得的濾液1000×g離心10 min，收集富含葉綠體的沉淀；
C. 收集步驟B離心后的上清液，用5 μm的濾網過濾，過濾液經2000 ×g離心10min，棄沉淀，上清液17000 ×g離心10 min，收集富含線粒體沉淀；
D. 收集得到的葉綠體和線粒體沉淀分別用洗滌緩沖液洗滌，并用DNase I消化以去除核基因組的污染；
E. 葉綠體沉淀的消化液1000×g離心10 min之后棄上清，沉淀用洗滌緩沖液洗滌，得到的即為葉綠體；線粒體沉淀的消化液17000×g離心10 min之后棄上清，沉淀用洗滌緩沖液洗滌，得到的即為線粒體。
2.根據權利要求1所述的同步分離高純度植物葉綠體和線粒體的方法，其特征在于，所述的步驟均在冰上或4℃離心機中進行。
3.根據權利要求1所述的同步分離高純度植物葉綠體和線粒體的方法，其特征在于，選取的葉片組織為植物的新鮮幼嫩葉片。
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