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[發明專利]一種同步分離高純度植物葉綠體和線粒體的方法有效

專利信息
申請號: 201710164468.8 申請日: 2017-03-17
公開(公告)號: CN106947729B 公開(公告)日: 2019-10-08
發明(設計)人: 華瑋;李俊;范世航;劉紅芳 申請(專利權)人: 中國農業科學院油料作物研究所
主分類號: C12N5/04 分類號: C12N5/04
代理公司: 武漢宇晨專利事務所 42001 代理人: 王敏鋒
地址: 430062 湖*** 國省代碼: 湖北;42
權利要求書: 查看更多 說明書: 查看更多
摘要:
搜索關鍵詞: 一種 同步 分離 純度 植物 葉綠體 線粒體 方法
【權利要求書】:

1.一種同步分離高純度植物葉綠體和線粒體的方法,其步驟是:

A. 植物葉片組織沖洗干凈并剪碎,按照葉片組織的質量與CIB緩沖液的體積比m: v為1: 15加入CIB緩沖液,研磨后依次通過70 μm、35 μm和15 μm濾網過濾,過濾液200×g離心5min,去除組織殘渣、細胞碎片;

B. 根據葉綠體和線粒體不同的沉降系數,將步驟A獲得的濾液1000×g離心10 min,收集富含葉綠體的沉淀;

C. 收集步驟B離心后的上清液,用5 μm的濾網過濾,過濾液經2000 ×g離心10min,棄沉淀,上清液17000 ×g離心10 min,收集富含線粒體沉淀;

D. 收集得到的葉綠體和線粒體沉淀分別用洗滌緩沖液洗滌,并用DNase I消化以去除核基因組的污染;

E. 葉綠體沉淀的消化液1000×g離心10 min之后棄上清,沉淀用洗滌緩沖液洗滌,得到的即為葉綠體;線粒體沉淀的消化液17000×g離心10 min之后棄上清,沉淀用洗滌緩沖液洗滌,得到的即為線粒體。

2.根據權利要求1所述的同步分離高純度植物葉綠體和線粒體的方法,其特征在于,所述的步驟均在冰上或4℃離心機中進行。

3.根據權利要求1所述的同步分離高純度植物葉綠體和線粒體的方法,其特征在于,選取的葉片組織為植物的新鮮幼嫩葉片。

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