[發(fā)明專利]一種用于睪丸輸出管注射的注射針制備方法

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• 申請?zhí)枺?/td>: 201710164464.X
• 申請日: 2017-03-17
• 公開（公告）號: CN106943203A
• 公開（公告）日: 2017-07-14
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 冉林武;楊文;陳健茂;李紅兵;王曉東;榮瑞奇
• 申請（專利權(quán)）人: 寧夏醫(yī)科大學(xué)
• 主分類號: A61D7/00
• 分類號: A61D7/00;B24B19/16
• 代理公司: 廣州市一新專利商標(biāo)事務(wù)所有限公司44220
• 代理人: 張芳

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種注射針的制備方法，尤其是涉及一種用于睪丸輸出管注射的注射針制備方法。

背景技術(shù)

轉(zhuǎn)基因小鼠已是醫(yī)學(xué)和生命科學(xué)研究重要的研究工具。原核顯微注射法制備轉(zhuǎn)基因小鼠是傳統(tǒng)經(jīng)典方法，但是其操作比較繁瑣，技術(shù)要求高。精子介導(dǎo)法制備轉(zhuǎn)基因小鼠是一種新思路，該方法成本低、操作簡便、周期短。睪丸注射是精子介導(dǎo)制備轉(zhuǎn)基因小鼠的重要方法。目前，利用該方法已成功制備了小鼠、大鼠及兔等實驗動物。通過睪丸注射法，可以有效地解決當(dāng)前制備轉(zhuǎn)基因小鼠操作復(fù)雜、成本高和效率低等問題，將會推動轉(zhuǎn)基因動物在人類疾病建模的應(yīng)用。另外，睪丸注射也是曲細(xì)精管內(nèi)干細(xì)胞移植的重要方法，為研究精子發(fā)生過程和男性不育發(fā)治療提供了新思路。

睪丸輸出管注射是睪丸注射的重要方法。該注射方法是將外源基因通過游離的、韌性強(qiáng)的輸出小管注射到睪丸曲細(xì)精管內(nèi)，進(jìn)而轉(zhuǎn)染生精細(xì)胞建立轉(zhuǎn)基因精子。該注射方法操作簡便可靠，而且不需要昂貴的儀器就能完成，只需要玻璃針就可以完成注射。注射針的質(zhì)量對注射效率影響非常大。好的注射針不但能提高注射效率，還能減少輸出管的損傷，提高制備轉(zhuǎn)基因動物的成功率。所以，注射針的制備非常重要，但是目前還沒有成熟的制備睪丸輸出管注射針的方法。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種制備方法簡單、獨特，而且用本方法制成的注射針非常容易插入睪丸輸出管，樣品滲漏少，提高注射效率，還能減少輸出管的損傷，提高制備轉(zhuǎn)基因動物的成功率、減少或避免動物死亡的一種用于睪丸輸出管注射的注射針制備方法。

本發(fā)明通過如下方式實現(xiàn)：

一種用于睪丸輸出管注射的注射針制備方法，其特征在于：該方法為將外徑為1mm的薄玻璃管，首先用Sutter P-1000拉針儀拉制成內(nèi)徑為1-3um的注射針，再用MF-900煅針儀將針尖在5um處切斷，用EG-400磨針儀磨制針尖角度為30度，最后用MF-900煅針儀將斜面拉尖即可；

所述薄玻璃管是外徑為1mm，內(nèi)徑為0.58mm，長10cm，內(nèi)徑含玻璃絲的玻璃管；

所述拉針儀具體參數(shù)如下：Heat：Ramp+30；Pull：10；Velocit：120；Time：0；Pressure：200；

所述針尖的磨制為將針內(nèi)徑5μm部位與玻璃珠剛好接觸，踩下腳控開關(guān)加熱，當(dāng)看到玻璃針與玻璃珠剛好粘在一起時，松開腳控開關(guān)，玻璃珠即可斷開玻璃管的尖端，得到內(nèi)徑在5μm的平口針，將得到的平口針再用EG-400磨針儀將針尖磨制成30度的斜面，將注射針固定在持針器上，并調(diào)整持針器與磨石的夾角為30度，磨削速度選擇為1000r/min，顯微鏡下仔細(xì)觀察，直到磨制出30度斜面，且邊緣整齊；

所述針尖的拉尖為用MF-900將注射針頭的斜面做成1-2μm的尖頭，將上述注射針安裝在煅針儀上，調(diào)節(jié)針尖位于玻璃珠上方，踩下腳控開關(guān)，當(dāng)發(fā)現(xiàn)針尖端有粘在玻璃珠的跡象時，快速拉開玻璃針，并松開腳控開關(guān)。

本發(fā)明具有如下效果：

1)方法簡單獨特：本發(fā)明提供的方法為該方法為將外徑為1mm的薄玻璃管，首先用Sutter P-1000拉針儀拉制成內(nèi)徑為1-3um的注射針，再用MF-900煅針儀將針尖在5um處切斷，用EG-400磨針儀磨制針尖角度為30度，最后用MF-900煅針儀將斜面拉尖即可。

2)提高注射成功率高，進(jìn)而減少或避免動物的死亡：動物的睪丸輸出管有一定的韌性和游離性，普通注射針需要反復(fù)穿刺才能刺入睪丸輸出管，對輸出管造成嚴(yán)重?fù)p傷，導(dǎo)致樣品滲漏，嚴(yán)重時會導(dǎo)致注射失敗和動物死亡。本申請?zhí)峁┑姆椒▽⑨樇饽ブ瞥?0度的斜面，并將斜面拉尖，可以一次性刺入睪丸輸出管，大大減少對輸出管的損傷和樣品滲漏，提高注射成功率高，進(jìn)而減少或避免動物的死亡。

3)制備方法簡單、成本低，有利于商業(yè)化生產(chǎn)：目前，國內(nèi)外還未見有同類產(chǎn)品的生產(chǎn)制造。本方法不需要特殊材料，而且原材料玻璃管來源方便，只需要幾分錢，成本低。另外，本方法使用儀器制備注射針，并提供了儀器的所有制備參數(shù)，保證了制備針的一致性，有利于商業(yè)化生產(chǎn)。

具體實施方式

一種用于睪丸輸出管注射的注射針制備方法，該方法為如下步驟：

a.玻璃管的選擇：選擇外徑為1mm，內(nèi)徑為0.58mm，長10cm的薄玻璃管，玻璃管內(nèi)徑應(yīng)含細(xì)玻璃絲，可以通過毛吸作用使液體充滿注射針管。玻璃管應(yīng)注意防塵，避免用手直接觸摸玻璃管，也不要用帶有滑石粉的手套操作玻璃管。