[發明專利]高效產氫功能基因載體pET32a-fdhF及其構建和應用有效
| 申請號： | 201710163682.1 | 申請日： | 2017-03-19 |
| 公開（公告）號： | CN106755044B | 公開（公告）日： | 2020-10-16 |
| 發明（設計）人： | 王海燕;程水源;劉偉;趙雅琪;徐嵐婷;王冕超 | 申請（專利權）人： | 北京工業大學 |
| 主分類號： | C12N15/70 | 分類號： | C12N15/70;C12N15/66;C12N1/21;C12P3/00;C12R1/19 |
| 代理公司： | 北京思海天達知識產權代理有限公司 11203 | 代理人： | 劉萍 |
| 地址： | 100124 *** | 國省代碼： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 高效 功能 基因 載體 pet32a fdhf 及其 構建 應用 | ||
【權利要求書】：
1.一種基因載體 pET32a-fdhF 在大腸桿菌BL21產氫上的應用，其特征在于，將基因載體pET32a-fdhF 轉化到大腸桿菌BL21中，在產氫培養基中培養此大腸桿菌生產氫氣；所述基因載體為包含有蠟狀芽孢桿菌甲酸脫氫酶 fdhF 基因的pET32a 質粒；建所述基因載體pET32a-fdhF 的方法，包括以下步驟：
(1)設計蠟狀芽孢桿菌甲酸脫氫酶fdhF 基因的引物，并擴增蠟狀芽孢桿菌甲酸脫氫酶fdhF 基因；蠟狀芽孢桿菌甲酸脫氫酶fdhF基因如sequence No.3所示；
(2)回收甲酸脫氫酶fdhF 基因的基因片段，進行測序驗證擴增基因的完整性；
(3)使用限制性內切酶NdeⅠ和XhoⅠ雙酶切pET32a 載體，切膠回收，獲得線性化載體；
(4)將準備好的線性化載體和fdhF 基因片段連接起來，得到含fdhF 基因片段的重組載體；
(5)將重組產物，轉化DH5α感受態細菌，得到基因載體pET32a-fdhF。
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