[發(fā)明專利]一種可異位展示兩種多肽的噬菌體雙展示載體

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201710162188.3
• 申請(qǐng)日: 2017-03-17
• 公開（公告）號(hào): CN106868032A
• 公開（公告）日: 2017-06-20
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 毛傳斌;李龑;楊明英
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 浙江大學(xué)
• 主分類號(hào): C12N15/70
• 分類號(hào): C12N15/70
• 代理公司: 杭州求是專利事務(wù)所有限公司33200
• 代理人: 邱啟旺

1.一種可異位展示兩種多肽的噬菌體雙展示載體，其特征在于，它通過以下方法制備得到：

(1)基于fd絲狀噬菌體fUSE55基因組1022位置的BsrGI單酶切位點(diǎn)和2244的BamHI單酶切位點(diǎn)，利用BsrGI/BamHI雙酶切獲得含有重組gene3的長(zhǎng)為1223bp的基因片段，所述fUSE55的序列如SEQ ID NO.1所示。

(2)基于fd絲狀噬菌體f88-4基因組1022位置的BsrG I單酶切位點(diǎn)和2221的BamHI單酶切位點(diǎn)。利用BsrGI/BamHI雙酶切敲除掉f88-4的野生gene3，獲得剩下長(zhǎng)為8034bp的基因片段，所述f88-4的序列如SEQ ID NO.2所示。

(3)構(gòu)建雙展示載體fd388：將步驟1得到的長(zhǎng)為1223bp的基因片段和步驟2得到的長(zhǎng)為8034bp的基因片段按1:3的比例，通過T4DNA連接酶16℃過夜連接。

(4)將連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化進(jìn)入JM109感受態(tài)細(xì)胞，并涂抹在四環(huán)素抗性平板上37℃過夜獲取陽(yáng)性單克隆，從而可以得到長(zhǎng)為9257bp的可異位展示兩種多肽的噬菌體雙展示載體fd388，fd388的序列如SEQ ID NO.3所示。