[發明專利]一種檢測miRNAs-21的方法、探針組及試劑盒

有效

• 申請號: 201710162174.1
• 申請日: 2017-03-17
• 公開（公告）號: CN106947811B
• 公開（公告）日: 2020-03-31
• 發明（設計）人: 鄒綱;王夢喬
• 申請（專利權）人: 中國科學技術大學
• 主分類號: C12Q1/6825
• 分類號: C12Q1/6825;C12Q1/6886;C12N15/11
• 代理公司: 北京集佳知識產權代理有限公司 11227
• 代理人: 趙青朵

本發明屬于分子生物學領域，具體公開了一種檢測miRNAs?21的方法、探針組及試劑盒。本發明所述檢測miRNAs?21的方法中修飾金納米棒的單鏈DNA與修飾聚二乙炔微米管的單鏈DNA通過雜交配對形成金納米棒修飾的聚二乙炔微米管，使聚二乙炔微米管端頭光波導熒光淬滅，與H1探針、H2探針和待測樣品混合后，miRNA?21可催化發夾探針自組裝，形成雙鏈結構，通過toehold進行單鏈取代，從而使聚二乙炔微米管端頭光波導熒光恢復，根據熒光變化強度可檢測待測樣品中的miRNAs?21的含量。實驗表明本發明所述檢測方法，對miRNA?21顯示了高的靈敏性和選擇性，檢測過程簡便、靈敏、快速，檢測結果準確。

技術領域

本發明涉及分子生物學領域，具體涉及一種檢測miRNAs-21的方法、探針組及試劑盒。

背景技術

MicroRNAs(miRNAs)是一類由18-24個堿基組成的非編碼單鏈小分子RNA，在轉錄后水平對基因表達發揮負調控作用，參與細胞生長、發育、凋亡等重要生物過程。最近的一些醫學研究表明，miRNA的表達水平，或增大或減少，都在某種程度上與人類重大疾病如癌癥等有著密不可分的聯系。這使得miRNA可以作為腫瘤標記物來早期地監控癌癥的發生。

miRNA-21的編碼基因定位于17q23.2，即液泡膜蛋白基因(vacuolemembraneprotein-1，VMP1)編碼區，VMP1基因的第十內含子。VMP1也被稱為跨膜蛋白49(transmembraneprotein-49,TMEM-49)。miRNA-21對多種癌癥都有高表達，如：胰腺癌、胃癌、肝癌、乳腺癌等等。因此miRNA-21是一個公認的致癌性小RNA，對miRNA-21進行定量檢測可以有效的監控癌癥的發生。

目前發展出了許多檢測miRNA的方法，比如Northern印跡技術、微陣列芯片(microarray)、實時反轉錄聚合酶鏈式反應、電化學方法、熒光分析、電化學發光、比色分析等等。但上述方法都具有一定的局限性，比如檢測靈敏度低、缺乏足夠的分析物、特異性不佳、需要耗費大量的時間和人力，而且經常需要昂貴和繁瑣的工具和熟練的專業人員，限制了其在臨床診斷方面的潛在應用。

熒光檢測方法，由于其靈敏度高、操作簡單，目前正在獲得越來越多的關注。然而，目前熒光傳感器具有一些特殊的局限性，包括探頭尺寸小，穩定性低，光漂白，與背景熒光光譜相重疊，低豐度和高序列相似性等等。因此開發一種能夠快速、高選擇性和高靈敏度地檢測miRNA-21的方法具有重要意義。

發明內容

有鑒于此，本發明的目的在于針對現有技術的不足，提供一種檢測miRNAs-21的方法、探針組及試劑盒。本發明所述檢測miRNAs-21的方法能夠快速、高選擇性和高靈敏度地檢測待測樣品中的miRNAs-21含量。

為實現本發明的目的，本發明采用如下技術方案：

一種檢測miRNAs-21的方法，將金納米棒修飾的聚二乙炔微米管與H1探針、H2探針和待測樣品混合，檢測金納米棒修飾的聚二乙炔微米管端頭光波導熒光亮度的變化；

其中所述金納米棒和聚二乙炔微米管分別經單鏈DNA修飾，且修飾金納米棒的單鏈DNA與修飾聚二乙炔微米管的單鏈DNA堿基互補；H1探針與H2探針均為發夾探針，在miRNAs-21存在下可自組裝形成雙鏈結構，然后通過toehold與修飾金納米棒的單鏈DNA發生鏈置換反應。

作為優選，所述修飾金納米棒的單鏈DNA的序列如SEQ ID NO：1所示；所述修飾聚二乙炔微米管的單鏈DNA的序列如SEQ ID NO：2所示。

作為優選，所述H1探針的序列如SEQ ID NO：3所示；所述H2探針的序列如SEQ IDNO：4所示。

作為優選，所述金納米棒修飾的聚二乙炔微米管固定在疏水片上。

作為優選，所述待測樣品為血清。