[發明專利]一種軟骨細胞的分離培養方法在審
| 申請號： | 201710161478.6 | 申請日： | 2017-03-17 |
| 公開（公告）號： | CN106701667A | 公開（公告）日： | 2017-05-24 |
| 發明（設計）人： | 陳海佳;葛嘯虎;王一飛;趙萌萌;王小燕 | 申請（專利權）人： | 廣州賽萊拉干細胞科技股份有限公司 |
| 主分類號： | C12N5/077 | 分類號： | C12N5/077 |
| 代理公司： | 北京集佳知識產權代理有限公司11227 | 代理人： | 趙青朵 |
| 地址： | 510000 廣東省廣州市開發區廣*** | 國省代碼： | 廣東;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 軟骨 細胞 分離 培養 方法 | ||
1.一種軟骨細胞的分離培養方法，其特征在于，包括如下步驟：
將軟骨組織處理成組織塊，加入胰蛋白酶進行消化，然后加入II型膠原酶進行消化；所述II型膠原酶的質量百分比濃度為0.05％～0.1％，所述II型膠原酶的消化時間為16～20h。
2.根據權利要求1所述的分離培養方法，其特征在于，所述II型膠原酶的質量百分比濃度為0.05％。
3.根據權利要求1或2所述的分離培養方法，其特征在于，所述II型膠原酶的消化時間為18h。
4.根據權利要求1至3中任一項所述的分離培養方法，其特征在于，所述胰蛋白酶的質量百分比濃度為0.25％。
5.根據權利要求1至4中任一項所述的分離培養方法，其特征在于，所述胰蛋白酶的消化時間為20～30min。
6.根據權利要求1至5中任一項所述的分離培養方法，其特征在于，所述組織塊為小于1mm3的組織塊。
7.根據權利要求1至6中任一項所述的分離培養方法，其特征在于，所述II型膠原酶進行消化后還包括細胞培養的步驟。
8.根據權利要求7所述的分離培養方法，其特征在于，所述細胞培養的培養基為含有10％FBS和0.1μg/mL EGF的DMEM/F12培養基。
9.根據權利要求7或8所述的分離培養方法，其特征在于，所述細胞培養的細胞密度為(1～10)×104個/mL。
10.根據權利要求1至9中任一項所述的分離培養方法，其特征在于，所述加入胰蛋白酶進行消化與所述加入II型膠原酶進行消化之間還包括清洗的步驟。
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