[發明專利]復合抗體提取物及其制備方法和應用

在審

• 申請號: 201710160717.6
• 申請日: 2017-03-17
• 公開（公告）號: CN108623680A
• 公開（公告）日: 2018-10-09
• 發明（設計）人: 蒙曉;符美燕;蒙永祥;農定猛;謝民強;魏理;葉夢婕
• 申請（專利權）人: 蒙永祥
• 主分類號: C07K16/12
• 分類號: C07K16/12;C07K16/14;C07K16/02;A61K8/64;A61K8/98;A61K8/67;A61K8/34;A61K8/41;A61Q19/00;A61Q17/00;A61P31/04;A61P31/10;A61P31/02
• 代理公司: 廣州華進聯合專利商標代理有限公司 44224
• 代理人: 鄭彤;曾云騰

1.一種復合抗體提取物的制備方法，其特征在于，包括如下步驟：

(1)制備含面部致病菌的復合抗原，所述面部致病菌包括痤瘡丙酸桿菌、金黃色葡萄球菌、綠膿桿菌、溶血性鏈球菌和白色念珠菌；

(2)采用所述復合抗原對雞進行強化免疫，得到免疫雞的免疫雞蛋；

(3)對所述免疫雞蛋的蛋黃分離純化，獲取粗提物干粉；

(4)將所述粗提物干粉依次通過離子交換柱層析和凝膠過濾層析分離純化，獲得含抗痤瘡丙酸桿菌、抗金黃色葡萄球菌、抗綠膿桿菌、抗溶血性鏈球菌和抗白色念珠菌的復合抗體提取物。

2.根據權利要求1所述的復合抗體提取物的制備方法，其特征在于，在步驟(1)中，所述制備含面部致病菌的復合抗原包括如下步驟：分別將痤瘡丙酸桿菌、金黃色葡萄球菌、綠膿桿菌、溶血性鏈球菌和白色念珠菌在37℃條件下恒溫培養，將培養得到的各面部致病菌滅活；將已滅活的痤瘡丙酸桿菌、金黃色葡萄球菌、綠膿桿菌、溶血性鏈球菌和白色念珠菌按照質量比20-35:15-20:10-15:20-25:10-15在pH6.0-7.0的0.1M PBS溶液中混合均勻，制得濃度為1.0-2.2mg/mL的菌體混合體溶液，按等體積比例加入弗氏佐劑至所述菌體混合溶液中，高速均質，即得所述復合抗原。

3.根據權利要求2所述的復合抗體提取物的制備方法，其特征在于，在步驟(1)中，所述面部致病菌還包括大腸桿菌；所述痤瘡丙酸桿菌、金黃色葡萄球菌、綠膿桿菌、溶血性鏈球菌、白色念珠菌和大腸桿菌按照質量比為20-35:15-20:10-15:20-25:10-15:10-20的比例混合；

對應地，在步驟(4)中，將所述粗提物干粉依次通過離子交換柱層析和凝膠過濾層析分離純化，獲得含抗痤瘡丙酸桿菌、抗金黃色葡萄球菌、抗綠膿桿菌、抗溶血性鏈球菌、抗白色念珠菌和抗大腸桿菌的復合抗體提取物。

4.根據權利要求1至3任一項所述的復合抗體提取物的制備方法，其特征在于，在步驟(3)中，所述獲取粗提物干粉包括如下步驟：取所述免疫雞蛋的蛋黃，按蛋黃總體積的3-8倍加入蒸餾水稀釋，混勻，調節pH值為5.0-6.0，冷卻至4℃，靜置10-12h；高速離心15-25min，取上清液超濾并濃縮8-12倍，將質量濃度為12％-16％硫酸鈉溶液加入濃縮液中，混勻，再高速離心，取上清液超濾膜過濾除菌，濾液冷凍干燥，即得粗提物干粉。

5.根據權利要求1至3任一項所述的復合抗體提取物的制備方法，其特征在于，在步驟(4)中，所述離子交換柱層析分離純化的條件為：采用弱堿性陰離子交換層析柱，采用pH6.5-7.0的0.01M PBS緩沖液上樣平衡，pH6.5-7.0的0.1M PBS緩沖液洗脫分離純化；

所述凝膠過濾柱層析分離純化的條件為：采用Sephadex G200層析柱，采用的洗脫液為pH6.5-7.0的0.1M PBS緩沖液。

6.由權利要求1至5中任一項所述的復合抗體提取物的制備方法制備獲得的復合抗體提取物。

7.權利要求6所述的復合抗體提取物在制備具有抗菌祛痘功效的護膚品中的應用。

8.一種抗菌爽膚水，其特征在于，所述爽膚水由以下質量百分比的原料組成：權利要求6所述的復合抗體提取物0.15％-0.3％、生育酚乙酸酯0.2％-1％、甘油2％-8％、三乙醇胺0.3％-2.5％、透明質酸0.02％-0.2％、海藻糖2％-5％、卵磷脂1％-5％、PEG-40氫化蓖麻油0.1％-0.25％、苯氧乙醇0.5％-1.0％、羥苯甲酯0.02％-0.2％、香精0.02％-1％及余量水。