[發明專利]Ⅰ亞群禽腺病毒通用型PCR檢測引物及檢測方法

有效

• 申請號: 201710159937.7
• 申請日: 2017-03-17
• 公開（公告）號: CN106868212B
• 公開（公告）日: 2021-01-22
• 發明（設計）人: 肖躍強;于雪;劉吉山;楊慧;張松林;苗立中;沈志強
• 申請（專利權）人: 山東省濱州畜牧獸醫研究院
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12N15/11;C12R1/93
• 代理公司: 濟南泉城專利商標事務所 37218
• 代理人: 葉平平

本發明公開了一種Ⅰ亞群禽腺病毒通用型PCR檢測引物及檢測方法，屬于禽類病毒檢測技術領域。本發明Ⅰ亞群禽腺病毒通用型PCR檢測引物由上游引物和下游引物組成；所述上游引物如SEQ ID NO.1所示，所述下游引物如SEQ ID NO.2所示。Ⅰ亞群禽腺病毒檢測方法，包括使用所述的Ⅰ亞群禽腺病毒通用型PCR檢測引物進行PCR擴增反應。所述PCR擴增反應產物出現494bp片段時為陽性，否則為陰性。本發明方法為能夠檢測Ｉ亞群禽腺病毒A、B、C、D、E等5個種共12個血清型的通用方法，具有通用性好、特異性強、敏感性高、操作方便、快速準確等特點。

技術領域

本發明涉及禽類病毒檢測技術領域，特別涉及一種Ⅰ亞群禽腺病毒通用型PCR檢測引物及檢測方法。

背景技術

Ⅰ亞群禽腺病毒（group Ⅰ fowl aviadenovirus， FAdV）屬于腺病毒科（Adenoviridae）禽腺病毒屬（genus Aviadenovirus）成員，是基因組相對保守的雙鏈DNA病毒，主要引起禽類包涵體肝炎（inclusion body hepatitis，IBH）、心包積液綜合征（hydropericardium syndrome，HPS）和肌胃糜爛癥（gizzard erosion，GE）等。

FAdV被分為A、B、C、D、E 5個種共12個血清型，包括1-8a、8b-11，除此以外，還包括鴨腺病毒、鴿腺病毒與火雞腺病毒等暫定種（文獻：Saif Y M. 禽病學[M]：第十二版. 蘇敬良，高 福，索 勛，譯. 北京：中國農業出版社，2012. 289-334.）。

2015年以來，我國山東、江蘇、河北、河南等省份暴發FAdV感染致病死亡，死亡率有的高達80%，目前已呈全國性流行趨勢，對養禽業造成了嚴重損失。

目前國內流行報道毒株包括FAdV-1（A種）、FAdV-2（D種）、FAdV-4（C種）、FAdV-8a（E種）、FAdV-8b（E種）、FAdV-10（C種）及FAdV-11（D種）血清型（文獻：牛登云, 沈元, 王蕊,等. 2015年我國Ⅰ群禽腺病毒分子流行病學調查 [J]. 中國家禽, 2016, 38(9): 65-68.文獻：國紀壘, 刁有祥, 程彥麗, 等. Ⅰ群禽腺病毒血清10型的致病性 [J]. 中國獸醫學報, 2013, 33(08): 1179-83.）。

由于FAdV A-E 5個種核苷酸同源性在52%-72%之間，而國內報道FAdV聚合酶鏈式反應（polymerase chain reaction，PCR）檢測方法多為針對單一血清型（文獻：袁萬哲, 張姍, 陳萍, 等. 禽腺病毒4型PCR檢測方法的建立與應用 [J]. 中國動物檢疫, 2016, 33(05): 72-74.），不能通用檢測，或者針對Hexon蛋白基因采用套式PCR方法檢測（文獻：索南卓瑪, 增巴. Ⅰ群禽腺病毒套式PCR檢測方法的建立及應用 [J]. 中國畜牧獸醫, 2013,40(08): 30-33.），過程繁瑣、耗時長（4-5小時，甚至更長），在開展臨床檢測時存在局限性。

發明內容

為了彌補現有技術的不足，以解決現有技術中檢測Ⅰ亞群禽腺病毒過程繁瑣、耗時長且檢測僅可針對單一血清型的問題，本發明提供了一種Ⅰ亞群禽腺病毒通用型PCR檢測引物及檢測方法，本發明方法為能夠檢測Ｉ亞群禽腺病毒A、B、C、D、E等5個種共12個血清型的通用方法，具有通用性好、特異性強、敏感性高、操作方便、快速準確等特點。

本發明的技術方案為：

一種Ⅰ亞群禽腺病毒通用型PCR檢測引物，所述引物由上游引物和下游引物組成；所述上游引物如SEQ ID NO.1所示，所述下游引物如SEQ ID NO.2所示。

一種Ⅰ亞群禽腺病毒檢測方法，所述方法包括使用所述的Ⅰ亞群禽腺病毒通用型PCR檢測引物進行PCR擴增反應。