[發明專利]一種促進嗜熱脂肪芽孢桿菌芽孢生長萌發的方法

在審

• 申請號: 201710156358.7
• 申請日: 2017-03-16
• 公開（公告）號: CN106867940A
• 公開（公告）日: 2017-06-20
• 發明（設計）人: 王瑩;陶文靜;劉磊;郭云瑕
• 申請（專利權）人: 青島農業大學
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12N3/00;C12Q1/04;C12R1/07
• 代理公司: 北京科億知識產權代理事務所(普通合伙)11350
• 代理人: 湯東鳳

本發明公開了一種促進嗜熱脂肪芽孢桿菌芽孢生長和萌發的方法，將促進嗜熱脂肪芽孢桿菌的菌種在活化培養基上進行劃線培養得到活化的菌種；將活化的菌種在產孢培養基上進行劃線培養或者涂布培養得到嗜熱脂肪芽孢桿菌芽孢；將得到的嗜熱脂肪芽孢桿菌芽孢用滅菌生理鹽水制成芽孢復溶液，然后向1ml檢測培養基中添加10?20μL芽孢復溶液混勻得混合菌液；混合菌液加入到無菌微孔板微孔中，向其中加入100μL純牛奶即可檢測。本發明利用嗜熱脂肪芽孢桿菌檢測牛奶中抗生素的殘留，提供一種促進芽孢的生長和芽孢萌發的方法，大大降低了生產成本，縮短了檢測時間，可提高產品的競爭力。

技術領域

本發明涉及芽孢誘導和微生物檢測領域，具體涉及一種促進嗜熱脂肪芽孢桿菌芽孢生長和萌發的方法。

背景技術

嗜熱脂肪芽孢桿菌屬于嗜熱性需氧兼厭氧芽孢桿菌，利用葡萄糖產酸不產氣。其最適生長繁殖溫度為56～65℃，最高生長溫度為65～75℃，屬于嗜熱菌。當營養細胞受到營養缺乏、代謝產物積累或溫度變化等因素影響時，產生具有休眠特性且無毒、無熱源、無致病性的芽孢。芽孢對輻射、熱、干燥、極端pH和一些有毒化學物品等有很強的抵抗能力。該菌在微生物檢測領域有一個重要的用途，就是用來檢測牛奶中抗生素的殘留，國際乳品聯合會推薦的微生物檢測抗生素菌種為嗜熱脂肪芽孢桿菌。

目前牛奶中抗生素的檢測方法中，微生物檢測法以其操作簡便，經濟實惠的特點被國內外廣泛采用。其基本原理是將芽孢及其生長必須的營養物質和產酸指示劑(溴甲酚紫)固定在微孔板內，通過添加牛奶待測樣品后，在一定溫度培養一定時間，若芽孢正常萌發會產酸，使指示劑由紫色變成黃色，說明微孔板中的芽孢正常萌發，牛奶中不含有抗生素；若牛奶中含有抗生素，會抑制芽孢的萌發，指示劑不變色(保持紫色)。目前國際上最完善的產品是戴爾沃公司生產的檢測體系，其產品檢測所需時間為2.5-3小時，國內的產品檢測時間通常為3小時或更長，如果能夠縮短檢出時間，提高檢測效率，會大大提高產品的競爭力。

芽孢對外界環境極為敏感，一旦其探測到外部存在適宜萌發的條件，芽孢就開始萌發，迅速生長恢復到營養細胞狀態。本發明利用嗜熱脂肪芽孢桿菌作為牛奶抗生素檢測的敏感菌株，發明了一種促進芽孢生長及芽孢萌發的方法。

發明內容

本發明所要解決的技術問題是針對現有技術中存在的不足，提供一種促進嗜熱脂肪芽孢桿菌芽孢生長的方法，并將該芽孢應用到牛奶抗生素殘留檢測過程，大大降低了生產成本。，同時提供一種促進芽孢萌發的方法，從而縮短牛奶抗生素的檢測時間，提高產品的競爭力。

為了實現上述目的，本發明采用如下技術方案：

一種促進嗜熱脂肪芽孢桿菌芽孢生長的方法，包括以下步驟：

(1)菌種活化：將促進嗜熱脂肪芽孢桿菌的菌種在活化培養基上進行劃線培養得到活化的菌種；

所述的劃線培養的培養溫度為55-65℃；

所述的劃線培養的培養時間為12-24h；

所述的活化培養基由以下重量百分比的原料組成：蛋白胨1％，牛肉膏0.3％，氯化鈉0.5％，瓊脂2％，蒸餾水補足至100％，調其pH為7.2±0.2后在121℃下滅菌20-30min后冷卻至室溫待用。

(2)產孢培養：將步驟(1)得到的活化的菌種在產孢培養基上進行劃線培養或者涂布培養得到嗜熱脂肪芽孢桿菌芽孢；

所述的劃線培養或者涂布培養的培養溫度為55-65℃；

所述的劃線培養或者涂布培養的培養時間為24-30h；

所述的產孢培養基由以下重量百分比的原料組成：胰蛋白胨1.7％，植物蛋白胨0.3％，氯化鈉0.5％，磷酸氫二鉀0.25％，瓊脂2％、吐溫-80 0.5-1％，蒸餾水補足至100％，調其pH為7.3±0.2后在121℃下滅菌20-30min后冷卻至室溫待用；