[發(fā)明專利]斜帶石斑魚補(bǔ)體C1INH基因、載體、重組菌株和蛋白及其應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201710151088.0
• 申請(qǐng)日: 2017-03-14
• 公開（公告）號(hào): CN107011424B
• 公開（公告）日: 2020-07-03
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王維娜;羅盛偉;謝仁崇;劉媛;康歡
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 華南師范大學(xué)
• 主分類號(hào): C07K14/46
• 分類號(hào): C07K14/46;C12N15/12;A61K38/17;A61P37/04;A23K20/147
• 代理公司: 廣州嘉權(quán)專利商標(biāo)事務(wù)所有限公司 44205
• 代理人: 鄭瑩

本發(fā)明公開了石斑魚rC1INH?Nonserpin蛋白，其氨基酸序列如SEQ ID NO:4所示，或者是SEQ ID NO:4所示的氨基酸序列經(jīng)取代、缺失和/或增加一個(gè)或多個(gè)氨基酸和/或末端修飾且具有同等或更高活性的蛋白。本發(fā)明首次獲得了石斑魚的補(bǔ)體C1INH基因序列以及C1INH序列上的功能片段rC1INH?Nonserpin核苷酸序列，不僅豐富了石斑魚的基因庫，而且可應(yīng)用于制備重組蛋白、魚類免疫制劑或飼料添加劑，為石斑魚的生理免疫研究提供了新的理論與實(shí)踐基礎(chǔ)。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于基因工程技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種rC1INH-Nonserpin 蛋白及編碼該蛋白的基因、含有該基因的載體及其應(yīng)用；還涉及一種補(bǔ)體C1INH蛋白及編碼該蛋白的基因、含有該基因的載體及其應(yīng)用。

背景技術(shù)

補(bǔ)體在巨噬細(xì)胞活化因子所調(diào)控的動(dòng)物免疫系統(tǒng)中扮演著一個(gè)調(diào)控中樞，能夠有效通過提高免疫細(xì)胞對(duì)入侵病菌的吞噬力并同時(shí)刺激超氧化物酶的產(chǎn)生，從而挺高機(jī)體的免疫能力。然而，補(bǔ)體過度的激活會(huì)造成機(jī)體的損傷。在補(bǔ)體系統(tǒng)當(dāng)中，補(bǔ)體C1抑制物(C1INH)是補(bǔ)體元件中唯一的一個(gè)負(fù)調(diào)控元件。補(bǔ)體C1INH是一個(gè)單鏈分子，一般由478個(gè)氨基酸殘基組成，鏈內(nèi)存在兩對(duì)二硫鍵，N末端為Nonserpin結(jié)構(gòu)域，C末端為絲氨酸蛋白酶抑制蛋白結(jié)構(gòu)域。在功能上，C1INH能夠負(fù)調(diào)控三條補(bǔ)體激活途徑，其能夠通過與C1r和C1s的活性部分形成共價(jià)的酯鍵而抑制活性，從而抑制了補(bǔ)體的經(jīng)典途徑； C1INH可以通過抑制MBSP-1和MBSP-2的活性，從而抑制補(bǔ)體的凝集素途徑；C1INH也可以通過B因子與C3b的結(jié)合，從而抑制補(bǔ)體的旁路途徑。 C1INH是一個(gè)多功能的大分子，其除了能夠抑制補(bǔ)三條補(bǔ)體途徑之外，C1INH的存在還可以有效地拮抗LPS的毒副作用，抑制激肽釋放酶原，凝血因子XII，凝血因子XI和纖溶酶的活性，對(duì)炎癥反應(yīng)具有重要的調(diào)控作用。

斜帶石斑魚（Epinepheluscoioides）屬于鱸形目(Perciformes)，鮨科(Serranidae)，石斑魚亞科(Epinephelinae)，石斑魚屬(Epinephelus)，是暖水性的礁棲魚類，在印度洋和太平洋的熱帶、亞熱帶海域廣泛分布。石斑魚屬于名貴海產(chǎn)魚類之一，其肉質(zhì)鮮美，倍受各地消費(fèi)者的喜愛，經(jīng)濟(jì)價(jià)值巨大。但是，由于面對(duì)著目前的急劇的氣候變化災(zāi)害和嚴(yán)重污染的水質(zhì)問題，從而導(dǎo)致了其致病率和死亡率居高不下，對(duì)石斑魚的人工養(yǎng)殖造成嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)打擊，也是一個(gè)難以解決的問題。如何增強(qiáng)石斑魚的抗逆能力，提高養(yǎng)殖存活率，是目前亟待解決的難題。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的一個(gè)目的在于提供一種石斑魚rC1INH-Nonserpin蛋白。

本發(fā)明的另一目的在于提供編碼上述石斑魚rC1INH-Nonserpin蛋白的基因。

本發(fā)明的另一目的在于提供一種石斑魚補(bǔ)體C1INH的結(jié)構(gòu)域蛋白，即石斑魚補(bǔ)體rC1INH-Nonserpin蛋白。

本發(fā)明的另一目的在于提供編碼上述石斑魚補(bǔ)體C1INH蛋白的基因。

本發(fā)明的另一目的在于提供含有石斑魚補(bǔ)體C1INH蛋白基因及功能片段rC1INH-Nonserpin的克隆載體。

本發(fā)明的另一目的在于提供含有石斑魚補(bǔ)體C1INH蛋白基因及功能片段rC1INH-Nonserpin的表達(dá)載體。

本發(fā)明的另一目的在于提供一種石斑魚補(bǔ)體C1INH功能片段rC1INH-Nonserpin重組蛋白及其制備方法。

本發(fā)明的另一目的在于提供石斑魚rC1INH-Nonserpin蛋白和/或C1INH蛋白在提高石斑魚免疫力中的應(yīng)用。

本發(fā)明所采取的技術(shù)方案是：