[發明專利]一種微生物谷氨酰胺轉胺酶穩定性的檢測方法

有效

• 申請號: 201710150810.9
• 申請日: 2017-03-14
• 公開（公告）號: CN108570491B
• 公開（公告）日: 2022-01-11
• 發明（設計）人: 金明飛;王志珍;常忠義;高紅亮;陳中山;王玲轉;易正芳;步國建
• 申請（專利權）人: 華東師范大學;泰興市東圣生物科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/48
• 分類號: C12Q1/48;C12N9/10
• 代理公司: 上海麥其知識產權代理事務所(普通合伙) 31257
• 代理人: 董紅曼

1.一種MTGase穩定性的檢測方法，其特征在于，所述方法包括以下步驟：

（1）MTGase溶液的制備

將MTGase溶解在緩沖液中，調節溶液pH為5.0-6.0，離心收集，得到MTGase上清液；所述MTGase為由茂源鏈霉菌所產的MTGase；

（2）離子交換層析

將步驟（1）制備得到的MTGase上清液進行陽離子交換層析；

（3）MTGase I2 / MTGase I1的比值確定

離子交換層析過程中，隨著洗脫緩沖液的比例不斷增加，洗脫得到的MTGase的pH不斷增加，根據pH的變化可以分離得到MTGase的兩個同分異構體MTGase I1和MTGase I2，分別根據洗脫峰計算峰積分面積，計算兩個同分異構體的峰面積比值；

所述同分異構體MTGase I1對應的pH范圍為5.0-6.5；所述同分異構體MTGase I2對應的pH范圍為6.6-8.0；

根據MTGase I2 / MTGase I1的比值判斷MTGase的穩定性， MTGase I2 / MTGase I1的比值越低，MTGase的穩定性越高。

2.如權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟（1）中，所述緩沖液選自磷酸鹽緩沖液、Tris-HCl緩沖液、醋酸鹽緩沖液。

3.如權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟（1）中，若MTGase的存在形式為未經處理的微生物發酵液時，先將發酵液離心，收集上清，然后溶解在緩沖液中，調節溶液pH為5.0-6.0之間，離心收集上清；或，先用預冷的無水乙醇處理發酵液，靜置后，離心收集沉淀，得到MTGase的粗提物，然后再溶解在緩沖液中，調節溶液pH為5.0-6.0之間，離心收集上清。

4.如權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟（2）中，所述陽離子交換層析中采用的平衡緩沖液選自磷酸鹽緩沖液、Tris-HCl緩沖液、醋酸鹽緩沖液，pH為5.0-6.0。

5.如權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟（2）中，所述陽離子交換層析中采用的洗脫緩沖液選自磷酸鹽緩沖液、Tris-HCl緩沖液、醋酸鹽緩沖液，pH為8.0-9.0。

6.如權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟（2）中，樣品MTGase上清液上樣的總蛋白量為5-20mg，總酶活為100-300U。

7.如權利要求1所述的方法，其特征在于，若MTGase I2 / MTGase I1的值低于1.5，則MTGase在pH為7.0溫度為37℃條件下保存5天時，保存率大于80%；

若MTGase I2 / MTGase I1的值高于2.0，則MTGase在pH為7.0，溫度為37℃條件下保存5天時，保存率小于60%；

若MTGase I2 / MTGase I1的值大于等于1.5，小于等于2.0，則MTGase在pH為7.0，溫度為37℃條件下保存5天時，保存率大于等于60%，小于等于80%。