[發明專利]一種天然組織來源的半月板脫細胞材料及其制備方法在審
| 申請號： | 201710150109.7 | 申請日： | 2017-03-14 |
| 公開（公告）號： | CN106943628A | 公開（公告）日： | 2017-07-14 |
| 發明（設計）人： | 林賢豐;陳蘊繽;陳家鑫 | 申請（專利權）人： | 浙江大學 |
| 主分類號： | A61L27/36 | 分類號： | A61L27/36;A61K35/32;A61P19/08 |
| 代理公司： | 杭州求是專利事務所有限公司33200 | 代理人： | 葉志堅 |
| 地址： | 310027 浙*** | 國省代碼： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 天然 組織 來源 半月板 細胞 材料 及其 制備 方法 | ||
1.一種天然組織來源的半月板脫細胞材料，其特征在于：將哺乳動物任意半月板組織經含蛋白酶抑制劑的生理鹽水緩沖液、有機溶劑溶液、含Triton X的PBS緩沖液、含SDS的PBS緩沖液和含DNA酶的PBS緩沖液處理，獲得脫細胞半月板材料；
所述的含蛋白酶抑制劑的生理鹽水緩沖液質量濃度為1％-5％，蛋白酶抑制劑含量為10KIU/ml；
所述的有機溶劑溶液為三種溶液中的一種，三種溶液分別為等體積比的氯仿和甲醇溶液，質量濃度10％-100％的丙酮溶液，質量濃度30％-70％的乙醇溶液；
所述的含Triton X的PBS緩沖液的質量濃度1％-5％的Triton X-200或Triton X-100的PBS緩沖液；
所述的含SDS的PBS緩沖液的質量濃度0.5％-5％的SDS的PBS緩沖液，其中混合1-20mmol/L的Tris；
所述的含DNA酶的PBS緩沖液中DNA酶質量濃度為0.01-0.5mg/ml。
2.根據權利要求1所述的一種天然組織來源的半月板脫細胞材料的制備方法，其特征在于，該方法具體包括以下步驟：
(1)取哺乳動物全身任意半月板組織用無菌生理鹽水漂洗3次、20分鐘/次，去除血液、殘余肌肉組織、毛發和韌帶；
(2)接著在含蛋白酶抑制劑的生理鹽水緩沖液中，恒溫45℃搖床100rpm震蕩8-24小時；
(3)在有機溶劑溶液中，恒溫45℃搖床100rpm震蕩脫脂2-12小時；
(4)在含Triton X的PBS緩沖液中，加入青霉素和鏈霉素混合抗菌液，恒溫45℃搖床100rpm震蕩4-15天；
(5)在含SDS的PBS緩沖液中，加入青霉素和鏈霉素混合抗菌液，恒溫45℃搖床100rpm震蕩2-8天；
(6)在含DNA酶的PBS緩沖液中，加入青霉素和鏈霉素混合抗菌液，37℃搖床100rpm震蕩2-12小時；
(7)在無菌生理鹽水中，37℃搖床100rpm震蕩72小時，即得天然組織來源的半月板脫細胞材料；
混合抗菌液中青霉素和鏈霉素的濃度分別為10KIU/ml、10KIU/ml，青霉素和鏈霉素的比例為1:1；步驟(4)-(6)中PBS緩沖液和混合抗菌液體積比分別為10:1、10:1、5:1；
步驟(2)-(6)中，每個步驟完成后均用生理鹽水沖洗5小時。
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