[發(fā)明專利]一種全蝎酶解液超濾物制備工藝及其用途

在審

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• 申請日: 2017-03-14
• 公開（公告）號: CN107043799A
• 公開（公告）日: 2017-08-15
• 發(fā)明（設計）人: 王集會;王俊香;毛近隆;高世杰;史磊;張盼盼;張瑞
• 申請（專利權）人: 山東中醫(yī)藥大學
• 主分類號: C12P21/06
• 分類號: C12P21/06;C07K1/34;A61K38/01;A61P35/00
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發(fā)明涉及一種全蝎酶解超濾物(＞10KDa,相對分子量)、制備工藝及其抗肺癌藥物中的應用，屬于中藥提取工藝及其應用技術領域。

背景技術

目前在全球范圍內(nèi)肺癌已成為最為棘手的一種惡性腫瘤。全世界近五十年，肺癌的發(fā)病率男性增加了10-30％，而女性增加了3-8倍。，全球每年新增肺癌患者120萬人。在中國目前肺癌發(fā)病率年增26.9％，預計到2025年我國肺癌病人將達到100萬人，成為全球第一肺癌大國。肺癌發(fā)病率逐年上升的一個很重要的原因是吸煙和環(huán)境污染，因此可以預見在全國城市空氣質(zhì)量沒有明顯改善的形勢下肺癌的發(fā)病率很難降下來，因此研制預防和治療肺癌的新藥就成為了經(jīng)濟和社會和諧發(fā)展的緊迫任務。本研究根據(jù)全蝎所含有效成分的性質(zhì)與特點研制成功了最適劑型，其酶解液凍干粉和超濾物(＞10KDa)部分體內(nèi)外藥理實驗均證實對肺腺癌有明顯的抑制作用，對其進行完善，補充相關材料即可按新藥申報，投入市場后按20％肺癌患者使用該藥年全國銷售額可達到60億元左右，經(jīng)濟效益顯著。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種全蝎酶解液超濾物(＞10KDa,相對分子量)。本發(fā)明制得的全蝎酶解液超濾物(＞10KDa,相對分子量)能顯著地抑制體外肺腺癌 A549細胞株和體內(nèi)荷Lewise肺癌小鼠種植瘤的生長。

本發(fā)明的目的在于提供一種全蝎酶解液超濾物(＞10KDa)的制備工藝及制備的產(chǎn)品在抗癌藥物中的應用。

本發(fā)明采用以下技術方案：

一種全蝎酶解液超濾物(＞10KDa,相對分子量)，其特征在于，它是由以下步驟的方法制備得到：

(1)將活的野生全蝎用清水漂洗，瀝干，然后放入冷凍室冷凍后勻漿，然后在冷阱溫度-60℃，室溫真空狀態(tài)下冷凍干燥至粉末得全蝎凍干粉；

(2)取步驟(1)制得的全蝎凍干粉400克，加入胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶、彈性蛋白酶各2000U，在溫度40℃，酶解時間3h，酶解pH 8.5的條件下酶解，的酶解液。

(3)將步驟(2)所得的全蝎酶解液,用公稱分子量截留值大于10KDa的超濾組件進行超濾，得＞10KDa的酶解超濾物。

上述步驟(1)中冷凍室溫度為-18℃～-60℃，冷凍時間為2-72小時。

上述步驟(1)中冷凍干燥時間為12-24小時，真空度為10Pa，冷阱溫度為 -60℃。

上述步驟(2)中胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶、彈性蛋白酶用量各2000U，酶解溫度40℃，酶解時間3h，酶解pH 8.5。

上述步驟(3)中超濾膜為公稱分子量截留值大于10KDa的超濾組件。

上述全蝎酶解液超濾物(＞10KDa相對分子量)的制備工藝，其特征在于，它包括以下步驟：

(1)將活的野生全蝎用清水漂洗，瀝干，然后放入冷凍室冷凍后勻漿，然后在冷阱溫度-60℃，室溫真空狀態(tài)下冷凍干燥至粉末得全蝎凍干粉；

(2)取步驟(1)制得的全蝎凍干粉400克，加入胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶、彈性蛋白酶各2000U，在溫度40℃，酶解時間3h，酶解pH 8.5的條件下酶解，的酶解液。

(3)將步驟(2)所得的全蝎酶解液，根據(jù)酶解液體積，加入4倍量無水乙醇，-20℃放置過夜；4℃，10000rpm，低溫離心10min，得沉淀物，并對其冷凍干燥，并利用改良Lowry法測定蛋白質(zhì)含量。適量蒸餾水溶解凍干粉，8μm 濾膜過濾，0.1-0.2MPa壓力下過10KDa超濾膜，得到分子量＞10KDa段，冷凍干燥備用。

上述的全蝎酶解液超濾物(＞10KDa相對分子量)在體內(nèi)外抑制肺腺癌生長中的應用。實驗結果表明，本發(fā)明制備的全蝎酶解液超濾物(＞10KDa相對分子量)，對體外A549肺腺癌細胞株的生長有極顯著的抑制作用；體內(nèi)對荷Lewise 肺癌小鼠種植瘤的生長有極顯著的抑制作用。

本發(fā)明所有實驗中使用的冷凍干燥機型號為LGJ-18A型(北京四環(huán)儀器設備有限公司)，超濾器型號WT6002G(上海膜速)，全蝎為鉗蝎科動物東亞鉗蝎 Buthus martensii Karsch。

與現(xiàn)有技術相比，本發(fā)明的有益效果是：