[發(fā)明專利]一種硝化細(xì)菌硝化效果的快速檢測方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201710149628.1
• 申請日: 2017-03-14
• 公開（公告）號: CN106916873A
• 公開（公告）日: 2017-07-04
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 鄒益東;鄒蘇燕;薛宏基;邢華;劉鳳琴
• 申請（專利權(quán)）人: 無錫市中漁健寶生物有限公司;江蘇天石生物科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/02
• 分類號: C12Q1/02;G01N21/78
• 代理公司: 江蘇圣典律師事務(wù)所32237
• 代理人: 賀翔

1.一種硝化細(xì)菌硝化效果的快速檢測方法，其特征在于，具體步驟如下：

步驟一，準(zhǔn)備亞硝酸鹽溶液；

步驟二，配置亞硝酸鹽硝化反應(yīng)體系；

步驟三，硝化反應(yīng)；

步驟四，制備比色試劑；

步驟五，比色檢測；

步驟六，比色結(jié)果和硝化效果評估。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種硝化細(xì)菌硝化效果的快速檢測方法，其特征在于，所述的步驟一中的亞硝酸鹽溶液包括配置的亞硝基態(tài)氮標(biāo)準(zhǔn)工作液，或取含亞硝酸鹽的養(yǎng)殖水。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種硝化細(xì)菌硝化效果的快速檢測方法，其特征在于，所述的步驟二具體為：

2.1，采用有蓋的容器作為硝化反應(yīng)容器，將步驟一中準(zhǔn)備的亞硝酸鹽溶液在瓶中配置成不同體積梯度的硝化反應(yīng)底物溶液；

2.2，再向各個不同體積梯度的硝化反應(yīng)底物溶液瓶分別加入1g或1ml單位的硝化細(xì)菌，組成硝化反應(yīng)溶液，形成梯度硝化反應(yīng)體系。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種硝化細(xì)菌硝化效果的快速檢測方法，其特征在于，

所述的步驟三具體為：

3.1，將上述不同體積梯度的硝化反應(yīng)瓶蓋緊，充分振搖，使硝化細(xì)菌溶出分散，與底物混合均勻；

3.2，把硝化反應(yīng)瓶放入25℃～35℃的恒溫箱，維持16～22小時進(jìn)行硝化反應(yīng)。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種硝化細(xì)菌硝化效果的快速檢測方法，其特征在于，

所述的步驟四具體為：

4.1，制備格利斯試劑Ⅰ：稱取分析純對氨基苯磺酸0.5g溶于150mL30％冰醋酸，避光保存；

4.2，制備格利斯試劑Ⅱ：稱取分析純α-萘胺0.5g加入50mL蒸餾水中，煮沸至刻度，然后緩緩加入30％冰醋酸溶液15mL，使α-萘胺完全溶解，過濾，0℃～10℃冰箱保存。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的一種硝化細(xì)菌硝化效果的快速檢測方法，其特征在于，

所述的步驟五具體為：

5.1，將各個不同梯度硝化反應(yīng)瓶中的硝化反應(yīng)液以及不加硝化細(xì)菌作為對照的硝化反應(yīng)底物溶液，分別加到各比色管25mL刻度處；

5.2，對每個比色管各加入0.5ml格利斯試劑Ⅰ、后再加入0.5ml格利斯試劑Ⅱ，搖勻，靜置，在比色后5～8分鐘內(nèi)觀察結(jié)果。

7.根據(jù)權(quán)利要6所述的一種硝化細(xì)菌硝化效果的快速檢測方法，其特征在于，

所述的步驟六具體為：

6.1，第一種情況：若步驟5中所有梯度硝化反應(yīng)瓶對應(yīng)的比色管都顯示玫瑰紅色，且色度與作為對照的硝化反應(yīng)的底物溶液比色管沒有差異，顯示硝化反應(yīng)不產(chǎn)生硝化效果，可確定此硝化細(xì)菌無效，亞硝酸鹽的去除率為0％；

6.2，第二種情況：若步驟5中有的體積梯度硝化反應(yīng)瓶對應(yīng)的比色管沒有紅色生成，顯示為無色，即表明這個硝化反應(yīng)瓶中的硝化反應(yīng)液所含的亞硝酸鹽已經(jīng)完全轉(zhuǎn)化為硝酸鹽，亞硝酸鹽的去除率為100％；若梯度中有多個顯示為無色體積硝化反應(yīng)瓶溶液，取梯度中轉(zhuǎn)化形成最大的無色體積表示硝化效果；

6.3，第三種情況：若步驟5中有的體積梯度硝化反應(yīng)瓶對應(yīng)的比色管還顯紅色，但與對照管的色度相比有明顯差異，只需對色度最淡、最接近無色的硝化反應(yīng)瓶溶液，采用與對照稀釋液對比檢測的方法確定硝化效果；具體操作過程如下：分別吸取作為對照液的亞硝酸鹽底物溶液2.5mL或5mL或10mL或15mL或20mL到各比色管，各加水到25mL刻度稀釋，然后再與此硝化反應(yīng)液的比色管同時比色對比，找到色度相同或最接近的兩者，此時可按找到的稀釋對照比色管按如下公式計算出此硝化反應(yīng)比色管對應(yīng)硝化反應(yīng)瓶中溶液的亞硝酸鹽去除率(％)：

其等同無色體積(ml)表示硝化效果，計算公式如下：

等同無色體積(ml)＝硝化反應(yīng)液體積(ml)×亞硝酸鹽去除率(％)；

最后比較上述最大無色體積和等同無色體積(以ml計)，取體積數(shù)據(jù)較大的表示此硝化細(xì)菌的最高硝化效果。