[發明專利]一種測定人血清中甘膽酸的試劑盒及其應用方法

有效

• 申請號: 201710148175.0
• 申請日: 2017-03-13
• 公開（公告）號: CN106841596B
• 公開（公告）日: 2020-02-21
• 發明（設計）人: 馮志軍
• 申請（專利權）人: 北京美德美康生物技術有限公司
• 主分類號: G01N33/543
• 分類號: G01N33/543
• 代理公司: 北京維正專利代理有限公司 11508
• 代理人: 鄭興旺

1.一種測定人血清中甘膽酸的試劑盒，包括甘膽酸試劑R1、甘膽酸試劑R2和甘膽酸標準品，其中，

甘膽酸試劑R1的組成為：MES緩沖液100mmol/L，牛血清蛋白1.2g/L，NaCl電解液150mmol/L，Pro-Clin300 0.3g/L，乙二胺四乙酸二鈉3 mmol/L，疊氮鈉0.6g/L,人工合成的甘膽酸1mg/L，其中，此處的甘膽酸為人工合成的甘膽酸，其含有多個抗體靶位；

甘膽酸試劑R2的配制步驟：

S1、取5ml的包被緩沖液，加入80ul的200nm羧基膠乳微球，再加入50ul的20mg/mlCG抗體, 37度反應1小時；

S2、用包被緩沖液稀釋一定量的EDC試劑為1mg/ml，加50ul到上述S1的反應液中，繼續反應1小時；

S3、反應結束后，用超聲粉碎；

S4、用離心機離心，10000轉/分，10分鐘，棄去上清，加入與棄去上清等體積的偶聯緩沖液，再加入400ul的封閉緩沖液, 37度反應1小時；

S5、封閉完成后的試劑，超聲，方法同步驟S3；

S6、超聲后，用離心機離心，10000轉/分，10分鐘，棄去上清，加入與棄去的上清等體積的存儲緩沖液；

S7、去除黑色沉淀的，偶聯有抗體的膠乳微球，即為甘膽酸試劑R2；

甘膽酸標準品的配置步驟：配置組成為MES緩沖液100mmol/L、牛血清蛋白1.5g/L、乙二胺四乙酸二鈉3mmol/L、NaCl電解質166mmol/L和Pro-Clin300 0.5g/L 的緩沖液，并向上述緩沖液中加入不同量的人源性甘膽酸得到濃度分別為0、2.5、5、10、20、40、80ug/ml 的一組標準品；

其中，所述包被緩沖液為20mmol/L的MES，且PH為6.0，CG抗體為兔抗人甘膽酸抗體，封閉緩沖液為質量分數為5%的BSA，偶聯緩沖液為20mmol/L的HEPES，PH7.5，存儲緩沖液為50mmol/L的Tris，PH9.0，且含有質量分數為5%的甘油。