[發(fā)明專利]一種兔的視網(wǎng)膜色素變性模型的制備方法

在審

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• 申請日: 2017-03-14
• 公開（公告）號(hào): CN106822177A
• 公開（公告）日: 2017-06-13
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 姜來生;蔡可陽;廖琴;孫輝業(yè);左叢林;馮宇霞
• 申請（專利權(quán)）人: 昭衍（蘇州）新藥研究中心有限公司
• 主分類號(hào): A61K33/18
• 分類號(hào): A61K33/18
• 代理公司: 蘇州廣正知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司32234
• 代理人: 張利強(qiáng)

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物技術(shù)和醫(yī)藥領(lǐng)域，特別是涉及一種兔的視網(wǎng)膜色素變性模型的制備方法。

背景技術(shù)

視網(wǎng)膜色素變性是當(dāng)前主要致盲性疾病之一。視網(wǎng)膜色素變性是一種進(jìn)行性退行視網(wǎng)膜變性類疾病，它主要累及光感受器和色素上皮功能，是一種遺傳性眼病。目前視網(wǎng)膜色素變性仍無明確有效的治療藥物和治療方法，開發(fā)穩(wěn)定可重復(fù)的理想的動(dòng)物模型是解決相關(guān)研究和藥物臨床前藥物評價(jià)的關(guān)鍵。

兔眼球大，背景數(shù)據(jù)清晰、豐富，是適合眼科研究及臨床前藥物評價(jià)。碘酸鈉進(jìn)入眼循環(huán)后可破壞視網(wǎng)膜色素上皮。目前已有利用兔通過靜脈注射碘酸鈉誘導(dǎo)建立視網(wǎng)膜色素變性疾病模型，靜脈注射碘酸鈉方法雖然操作更簡單，但由于碘酸鈉隨靜脈血液回流，再通過心臟進(jìn)入機(jī)體各組織，進(jìn)入眼組織的碘酸鈉只是很少一部分，為到達(dá)視網(wǎng)膜色素變性的要求，必須給予較高劑量的碘酸鈉，在該條件下可見明顯的全身毒性，特別是肝臟、腎臟以及消化道，極易引起動(dòng)物某種或多種臟器障礙或衰竭，最終導(dǎo)致動(dòng)物死亡。靜脈注射碘酸鈉的方法，其引起視網(wǎng)膜色素變性的劑量與動(dòng)物致死劑量相近，加上動(dòng)物個(gè)體間體質(zhì)差異，導(dǎo)致成模率低，重復(fù)性差，動(dòng)物易死亡。1996年陳勤等，在“表皮生長因子治療碘酸鈉誘導(dǎo)視網(wǎng)膜色素上皮層掃描電鏡觀察”（眼科研究，第4期）文章中報(bào)道了通過耳緣靜脈給新西蘭兔注入10 mg/ml碘酸鈉（劑量30 mg/kg）誘導(dǎo)視網(wǎng)膜色素變性，但該方法劑量偏低，故需要重復(fù)注射，而且重復(fù)注射間隔時(shí)間對結(jié)果影響較大。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明主要解決的技術(shù)問題是提供一種兔的視網(wǎng)膜色素變性模型的制備方法，能用于視網(wǎng)膜色素變性的研究和治療藥物開發(fā)及臨床前評價(jià)。

為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明采用的一個(gè)技術(shù)方案是：提供一種兔的視網(wǎng)膜色素變性模型的制備方法，包括步驟為：將碘酸鈉溶液以頸內(nèi)動(dòng)脈注入的方式實(shí)施于兔，所述碘酸鈉溶液到達(dá)兔的眼內(nèi)。

在本發(fā)明一個(gè)較佳實(shí)施例中，所述碘酸鈉溶液是濃度為10 mg/ml的劑量為15 mg/kg的碘酸鈉溶液；所述碘酸鈉溶液由生理鹽水配制。

在本發(fā)明一個(gè)較佳實(shí)施例中，所述兔的視網(wǎng)膜色素變性模型的制備方法的具體步驟為：將兔的頸動(dòng)脈暴露，阻斷兔的頸總動(dòng)脈和頸外動(dòng)脈，將所述碘酸鈉溶液注入頸內(nèi)動(dòng)脈，注射結(jié)束后解除兔的頸外動(dòng)脈阻斷，再解除兔的頸總動(dòng)脈阻斷。

在本發(fā)明一個(gè)較佳實(shí)施例中，所述碘酸鈉溶液經(jīng)頸總動(dòng)脈注入兔的頸內(nèi)動(dòng)脈，推注時(shí)間為25-35秒。

在本發(fā)明一個(gè)較佳實(shí)施例中，解除兔的頸外動(dòng)脈阻斷后，45~90秒后再解除兔的頸總動(dòng)脈阻斷。

在本發(fā)明一個(gè)較佳實(shí)施例中，注射結(jié)束后用止血海綿壓迫注射點(diǎn)5~10分鐘止血。

本發(fā)明的有益效果是：本發(fā)明使用的碘酸鈉劑量小，對動(dòng)物全身毒性小，不影響動(dòng)物生命安全，操作簡單可行，可重復(fù)性好，個(gè)體間模型差異小，成功率高。能為視網(wǎng)膜色素變性的研究提供一種可靠的模型，同時(shí)為治療視網(wǎng)膜色素變性藥物研發(fā)和臨床前評價(jià)提供了動(dòng)物模型。

附圖說明

為了更清楚地說明本發(fā)明實(shí)施例中的技術(shù)方案，下面將對實(shí)施例描述中所需要使用的附圖作簡單地介紹，顯而易見地，下面描述中的附圖僅僅是本發(fā)明的一些實(shí)施例，對于本領(lǐng)域普通技術(shù)人員來講，在不付出創(chuàng)造性勞動(dòng)的前提下，還可以根據(jù)這些附圖獲得其它的附圖，其中：

圖1 是本發(fā)明兔的術(shù)前、術(shù)后3天、10天、3周、5周光相干斷層掃描（OCT）圖；

圖2 是本發(fā)明兔的術(shù)前、術(shù)后3天、10天、3周、5周視網(wǎng)膜電流圖（ERG）暗適應(yīng)0.01結(jié)果圖；

圖3 是本發(fā)明兔的術(shù)前、術(shù)后3天、10天、3周、5周視網(wǎng)膜電流圖（ERG）暗適應(yīng)3.0結(jié)果圖；

圖4 是本發(fā)明兔的術(shù)前、術(shù)后3天、10天、3周、5周視網(wǎng)膜電流圖（ERG）暗適應(yīng)10.0結(jié)果圖；

圖5 是本發(fā)明兔的術(shù)前、術(shù)后3天、10天、3周、5周眼底照相圖；

圖6 是本發(fā)明兔的術(shù)前、術(shù)后3天、10天、3周、5周眼底熒光造影圖；

圖7 是本發(fā)明兔的視網(wǎng)膜組織病理學(xué)HE染色圖（200×）；

圖8是本發(fā)明兔的腎臟組織病理學(xué)HE染色圖（100×）。

具體實(shí)施方式

下面將對本發(fā)明實(shí)施例中的技術(shù)方案進(jìn)行清楚、完整地描述，顯然，所描述的實(shí)施例僅是本發(fā)明的一部分實(shí)施例，而不是全部的實(shí)施例。基于本發(fā)明中的實(shí)施例，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員在沒有做出創(chuàng)造性勞動(dòng)前提下所獲得的所有其它實(shí)施例，都屬于本發(fā)明保護(hù)的范圍。

提供一種兔的視網(wǎng)膜色素變性模型的制備方法，具體見下：