[發(fā)明專利]一種鐵皮石斛基因組DNA的提取方法有效
| 申請(qǐng)?zhí)枺?/td> | 201710147466.8 | 申請(qǐng)日： | 2017-03-13 |
| 公開（公告）號(hào)： | CN106636075B | 公開（公告）日： | 2019-09-13 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | 向紅先 | 申請(qǐng)（專利權(quán)）人： | 上海歐易生物醫(yī)學(xué)科技有限公司 |
| 主分類號(hào)： | C12N15/10 | 分類號(hào)： | C12N15/10 |
| 代理公司： | 暫無信息 | 代理人： | 暫無信息 |
| 地址： | 201114 上海市*** | 國省代碼： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 鐵皮 石斛 基因組 dna 提取 方法 | ||
本發(fā)明提供了一種鐵皮石斛基因組DNA的提取方法，該方法包括步驟：（1）粉碎鐵皮石斛葉片；（2）制備鐵皮石斛DNA提取試劑，所述提取試劑的配方為：100mM Tris?Hcl、15mM EDTA、0.7M Nacl、3%(W/V)CATB、0.4%（W/V）抗壞血酸、0.1~0.3%（V/V）β?巰基乙醇；上述組分的溶液為水；再加入氯仿和異戊醇混合溶液，其中氯仿與異戊醇的體積比為1:1；所述混合溶液的加入體積占提取試劑總體積的1/2；（3）將步驟（1）所得物加入步驟（2）所得提取試劑中，在0~4℃下靜置20~40分鐘，離心，然后用乙醇水溶液進(jìn)行沉淀，即得DNA。本發(fā)明用時(shí)非常少，DNA純度高。
技術(shù)領(lǐng)域
本發(fā)明屬于基因工程技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種鐵皮石斛基因組DNA的提取方法。
背景技術(shù)
目前，對(duì)于植物DNA的提取，有很多方法，主要為CTAB和SDS法。然而，由于石斛類植物中有高含量的多糖和多酚和其它可用影響DNA提取分離的成分，使得一般的提取方法難以適應(yīng)鐵皮石斛DNA的提取難以獲得很好的效果。
《石斛屬植物基因組 DNA 提取方法的對(duì)比》對(duì)現(xiàn)有的CTAB和SDS進(jìn)行了驗(yàn)證，上述方法均不能獲得較好的DNA提取質(zhì)量。該研究對(duì)CTAB和SDS法進(jìn)行了改進(jìn)，主要的改進(jìn)點(diǎn)在于提高氯化鈉和β-巰基乙醇的濃度，不過，其同樣無法解決現(xiàn)有技術(shù)的一個(gè)難題：即提取過程需要水浴加熱和后續(xù)純化除雜問題。上述問題使得DNA的提取工作十分耗時(shí)。更為重要的是，純化步驟若操作不當(dāng)，更會(huì)容易影響DNA的提取質(zhì)量。
因此，如何尋求一種無須加熱同時(shí)能最大化節(jié)省純化時(shí)間的鐵皮石斛的DNA提取方法，是本領(lǐng)域亟待解決的技術(shù)問題。
發(fā)明內(nèi)容
針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的技術(shù)缺點(diǎn)，本發(fā)明的目的在于提供一種鐵皮石斛基因組DNA的提取方法，該方法包括如下步驟：
（1）粉碎鐵皮石斛葉片；
（2）制備鐵皮石斛DNA提取試劑，所述提取試劑的配方為：
100mM Tris-Hcl、15mM EDTA、0.7M Nacl、3%(W/V) CATB、0.4%（W/V）抗壞血酸、0.1~0.3%（V/V）β-巰基乙醇；
上述組分的溶液為水；
再加入氯仿和異戊醇混合溶液，其中氯仿與異戊醇的體積比為1:1；所述混合溶液的加入體積占提取試劑總體積的1/2；
（3）將步驟（1）所得物加入步驟（2）所得提取試劑中，在0~4℃下靜置20~40分鐘，離心，然后用乙醇水溶液進(jìn)行沉淀，即得DNA。
一般而言，利用CTAB的提取液進(jìn)行提取后，需要進(jìn)行純化處理。本發(fā)明直接將氯仿和異戊醇與提取液混合，組成提取試劑，直接用于鐵皮石斛的DNA提取；省去了常規(guī)方法的水浴加熱步驟，直接在冰浴（0~4℃）下靜置，便實(shí)現(xiàn)了DNA的高純度提取。
可以理解的是，本發(fā)明至少比常規(guī)方法節(jié)約了1個(gè)小時(shí)以上的提取時(shí)間，而且步驟十分的簡單。
優(yōu)選的，β-巰基乙醇的濃度為0.2%（V/V）。
所述乙醇水溶液中，乙醇的體積分?jǐn)?shù)為70~95%。優(yōu)選的，所述乙醇水溶液中，乙醇的體積分?jǐn)?shù)為75%。
優(yōu)選的，所述靜置時(shí)間為30分鐘。
本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)：
1、相對(duì)于常規(guī)的方法，本發(fā)明的處理時(shí)間非常的短，整個(gè)過程不到一個(gè)小時(shí)，無需后續(xù)的除雜操作步驟，直接可以得到高純度的DNA。
2、本發(fā)明無需加熱過程，僅僅需要在0~4℃（普通冰箱冷藏室或冰上）下便可進(jìn)行，十分的方便。
附圖說明
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