[發(fā)明專利]一種可視化金納米粒子探針的制備方法和應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201710147335.X
• 申請(qǐng)日: 2017-03-13
• 公開（公告）號(hào): CN106970032B
• 公開（公告）日: 2019-06-28
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 朱瑞琦;周影;宋金萍;雙少敏;董川
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 山西大學(xué)
• 主分類號(hào): G01N21/31
• 分類號(hào): G01N21/31;B82Y30/00;B82Y40/00;B82Y15/00
• 代理公司: 山西五維專利事務(wù)所(有限公司) 14105
• 代理人: 張福增

1.一種可視化金納米粒子探針的制備方法，其特征在于，步驟包括：

1)將50-150mL 1-3mM氯金酸溶液加入帶有回流裝置的燒瓶中，攪拌，加熱到沸騰，然后快速加入5-15mL 35-40mM檸檬酸鈉溶液，回流直到溶液變?yōu)榫萍t色；將燒瓶移出熱源，繼續(xù)攪拌，冷卻至室溫得到的金納米粒子，0-5℃下保存?zhèn)溆茫?/p>

2)分別將100-200μM 5-10μL巰基DNA1和DNA2與TCEP按照物質(zhì)的量的比為1:20-80混合均勻，室溫放置0.5-2小時(shí)；所述的DNA1和DNA2的序列分別是：

5’-CCCAGGTAAAAAAAAAA-HS-3’

5’-HS-AAAAAAAAAAACCTTCC-3’

3)分別取步驟1)得到的金納米粒子溶液500-1000μL于兩個(gè)玻璃管中，分別加入步驟2)處理得到的DNA1、DNA2和100-200μM 5-10μL MUA，加入二次水使溶液最終體積為1-2mL，混勻，將兩個(gè)玻璃管中的溶液置于暗室15-20小時(shí)；

4)向步驟3)得到的兩個(gè)玻璃管中的溶液各加1-2M Tris-HCl pH 7.0-7.5緩沖液5-10μL和1-2M NaCl溶液50-100μL，輕輕震蕩搖勻并置于暗室過(guò)夜；

5)向步驟4)得到的兩個(gè)玻璃管中的溶液各加1-2M Tris-HC pH7.0-7.5緩沖液1-5μL和1-2M NaCl溶液10-50μL，輕輕震蕩搖勻并置于暗室過(guò)夜；

6)分別取步驟5)得到的兩個(gè)玻璃管中的溶液各200-1000μL于兩個(gè)1.5mL離心管中，置于臺(tái)式離心機(jī)中以10000-15000rpm的轉(zhuǎn)速離心10-20分鐘，加入200-1000μL含100-200mMNaCl、15-25mM Tris-HCl pH 7.0-7.5的緩沖液使金納米粒子重新分散；

7)將步驟6)得到的兩種溶液混合均勻，加入1-2μL 100-200μΜ的腺苷適配體，使適配體與DNA的比例為0.2-1.0；

8)將步驟7)得到的溶液在50-70℃下反應(yīng)5-20分鐘，緩慢冷卻至室溫，并在2-7℃下保存。

2.如權(quán)利要求1所述的一種可視化金納米粒子探針的制備方法，其特征在于，所述步驟1)中氯金酸溶液的濃度為1mM，檸檬酸鈉溶液的濃度為38.8mM，保存溫度為4℃。

3.如權(quán)利要求1所述的一種可視化金納米粒子探針的制備方法，其特征在于，所述步驟2)中巰基DNA1和巰基DNA2的濃度為100μM、體積為6.6μL，室溫放置時(shí)間為1小時(shí)。

4.如權(quán)利要求1所述的一種可視化金納米粒子探針的制備方法，其特征在于，所述步驟3)中金納米粒子溶液體積為600μL，MUA的濃度為100μM、體積為6.6μL，最終體積為1mL，置于暗室時(shí)間為16小時(shí)。

5.如權(quán)利要求1所述的一種可視化金納米粒子探針的制備方法，其特征在于，所述步驟4)中向兩個(gè)玻璃管中的溶液各加1M pH 7.5的Tris-HCl緩沖液8.4μL，1M NaCl溶液76μL。

6.如權(quán)利要求1所述的一種可視化金納米粒子探針的制備方法，其特征在于，所述步驟5)中向兩個(gè)玻璃管中的溶液各加1M pH 7.5的Tris-HCl緩沖液4.2μL和1M NaCl溶液42μL。

7.如權(quán)利要求1所述的一種可視化金納米粒子探針的制備方法，其特征在于，所述步驟6)分別取兩個(gè)玻璃管中的溶液各500μL于兩個(gè)1.5mL離心管中，置于臺(tái)式離心機(jī)中以13000rpm的轉(zhuǎn)速離心15分鐘；加入500μL含1500mM NaCl，20mM Tris-HCl pH 7.0的緩沖液使金納米粒子重新分散。

8.如權(quán)利要求1所述的一種可視化金納米粒子探針的制備方法，其特征在于，所述步驟7)中腺苷適配體的體積為1.75μL、濃度是100μΜ，適配體與DNA的比例為0.6。