[發明專利]一種苗藥黑骨藤的組培快繁方法

有效

• 申請號: 201710147117.6
• 申請日: 2017-03-13
• 公開（公告）號: CN106613999B
• 公開（公告）日: 2018-08-17
• 發明（設計）人: 梁鈞淞;楊業容;莫昭展;韋敏
• 申請（專利權）人: 玉林師范學院
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 廣州市越秀區海心聯合專利代理事務所(普通合伙) 44295
• 代理人: 王洪娟

本發明涉及農業生物技術中植物組織培養的方法，具體地說，涉及一種苗藥黑骨藤的組培快繁方法，包括依次進行的如下步驟：獲取黑骨藤的外植體、外植體誘導、不定芽的增殖培養、不定芽的生根培養、試管苗移栽；所述的外植體誘導的誘導培養基包括：MS培養基、3.0～5.0mg/L KT、1.5～2.0mg/L 6?BA、20～30g/L蔗糖、3.5～4.0g/L瓊脂、0.5～1.0g/L活性炭，pH為5.4～5.8，本發明的方法的苗藥黑骨藤試管苗移栽成活率達到95％以上。

技術領域

本發明涉及農業生物技術中植物組織培養的方法，具體地說，涉及苗藥黑骨藤的組培快繁方法。

背景技術

苗藥黑骨藤(Periploca forrestil Schltr)，又名黑龍骨、滇杠柳等，為蘿藦科杠柳屬藤狀灌木，為苗族民間廣泛應用于治療閉合性軟組織損傷、風濕與類風濕等疾病的民族藥，其富含C21甾類、強心苷類、萜類等物質。黑骨藤作為一種苗藥，其歷史悠久，早在西漢劉向的《世說新語說苑辨物》中便有：“吾聞古之為醫者，曰苗父，醫道精純，方劑獨特，為世人稱道”的記載，清代《馬關縣志風俗篇》中就有“苗人良藥接骨祛風，其效如神”的描述。由于苗族人經常性含服黑骨藤，因此苗族人不易患風濕類疾病。目前已開發出黑骨藤追風活絡膠囊、黑骨藤伸筋透骨液等治療風濕類疾病中成藥。

鑒于目前國內對黑骨藤的組織培養相關研究未見有報道，本發明選擇黑骨藤帶節莖段為外植體，經誘導、增殖、生根、煉苗以及移栽等步驟，建立了苗藥黑骨藤的組織培養技術體系。本發明具有技術性強、成本低廉、成苗快等特點，可直接用于黑骨藤種苗的工廠化生產，對于促進苗藥黑骨藤的資源開發利用具有重要的現實意義。

目前，國內外尚未有黑骨藤組織培養技術的報道，也未有黑骨藤組培快繁專利的申請。

發明內容

本發明的目的是提供一種苗藥黑骨藤的組培快繁方法，本發明選擇黑骨藤帶節莖段為外植體，經誘導、增殖、生根、煉苗以及移栽等步驟，建立了苗藥黑骨藤的組織培養技術體系，從而實現了本發明的目的。

本發明提供的技術方案為：一種苗藥黑骨藤的組培快繁方法，包括依次進行的如下步驟：獲取黑骨藤的外植體、外植體誘導、不定芽的增殖培養、不定芽的生根培養、試管苗移栽；

所述的外植體誘導的誘導培養基包括：MS培養基、3.0～5.0mg/L KT、1.5～2.0mg/L6-BA、20～30g/L蔗糖、3.5～4.0g/L瓊脂、0.5～1.0g/L活性炭，pH為5.4～5.8。

在上述的苗藥黑骨藤的組培快繁方法中，所述的外植體誘導的方法為：將黑骨藤外植體經清洗消毒處理后切成1.5～2.5cm左右的帶節藤莖并接種到誘導培養基中，置于25～28℃進行全暗培養30～35天即可誘導形成不定芽。

在上述的苗藥黑骨藤的組培快繁方法中，不定芽的增殖培養所用的增殖培養基包括：MS培養基、2.0～3.0mg/L KT、0.5～1.0mg/L NAA、20～30g/L蔗糖、3.5～4.0g/L瓊脂、0.1～0.5g/L活性炭，pH為5.4～5.8。

在上述的苗藥黑骨藤的組培快繁方法中，所述的不定芽的增殖培養的方法具體為：將經過外植體誘導得到的不定芽切成長約1～1.5cm的莖段并接種到增殖培養基中培養25～30天即可實現不定芽的增殖。

在上述的苗藥黑骨藤的組培快繁方法中，不定芽的生根培養所用的生根培養基包括：1/2MS培養基、1.0～2.0mg/L GGR、0.5～1.0mg/L NAA、15～20g/L蔗糖、3.0～4.0g/L瓊脂、0.1～0.3g/L活性炭，pH為5.4～5.8。

在上述的苗藥黑骨藤的組培快繁方法中，所述的不定芽的生根培養的方法為：從經過增殖培養得到的不定芽的基部切取長約1.5～2.0cm的不定芽并接種到生根培養基中培養25～30天即能實現試管苗的生根。