[發明專利]普通小麥中維生素B1含量的高效液相色譜測定方法

在審

• 申請號: 201710146098.5
• 申請日: 2017-03-13
• 公開（公告）號: CN106967059A
• 公開（公告）日: 2017-07-21
• 發明（設計）人: 張艷;李婕筠;何中虎
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院作物科學研究所
• 主分類號: C07D415/00
• 分類號: C07D415/00;G01N30/02;G01N30/06
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司11245
• 代理人: 關暢,王春霞

1.一種普通小麥中維生素B1的提取方法，包括如下步驟：

將普通小麥粉制成全麥粉，所述全麥粉在醋酸鈉水溶液中進行酶解；所述酶解結束后的體系經過濾后濾液進行衍生化，加入正丁醇振蕩后離心，取上清液，即得到維生素B1；

所述酶解采用復合酶，所述復合酶為木瓜蛋白酶、酸性磷酸酶、α-淀粉酶和還原性谷胱甘肽的復合物。

2.根據權利要求1所述的提取方法，其特征在于：所述醋酸鈉水溶液的摩爾濃度為0.05M；

所述醋酸鈉水溶液的pH值為4.50～4.52；

所述全麥粉與所述醋酸鈉水溶液的質量體積比為2.5～5g：25～50mL。

3.根據權利要求1或2所述的提取方法，其特征在于：所述酶解的溫度為36～38℃，時間為16～18h；

所述全麥粉、所述木瓜蛋白酶、所述酸性磷酸酶與所述α-淀粉酶的質量比為2.5g：0.05～0.1g：0.01～0.02g：0.005～0.01g，所述全麥粉與所述還原性谷胱甘肽的用量比為2.5g：250～500μl。

4.根據權利要求1-3中任一項所述的提取方法，其特征在于：所述衍生化采用的衍生化試劑為鐵氰化鉀水溶液與氫氧化鈉水溶液的混合液；

所述鐵氰化鉀水溶液的質量分數為1％；

所述氫氧化鈉水溶液的摩爾濃度為3.75M；

所述鐵氰化鉀水溶液與所述氫氧化鈉水溶液的體積比為1：24。

5.根據權利要求4所述的提取方法，其特征在于：所述濾液、所述衍生化試劑與所述正丁醇的體積比為1：1～3：0～1，但所述正丁醇的添加量不為零。

6.根據權利要求1-5中任一項所述的提取方法，其特征在于：所述離心在如下條件下進行：

溫度為2～8℃；

轉速為4000～4500g；

時間為1～3min。

7.一種普通小麥中維生素B1含量的測定方法，包括如下步驟：

(1)制作標準曲線

1)配制至少3種不同濃度的維生素B1標準品的鹽酸溶液；

2)將所述維生素B1標準品的鹽酸溶液進行如權利要求1-6中任一項所述提取方法中的所述衍生化和所述離心步驟，收集的上清液過醋酸纖維膜得到維生素B1標準品溶液；

3)將所述維生素B1標準品溶液進行高效液相檢測，得到不同濃度所述維生素B1標準品溶液的峰面積，以所述峰面積為橫坐標，以所述維生素B1標準品溶液的濃度為縱坐標，制作標準曲線；

(2)測定普通小麥中維生素B1的含量

按照權利要求1-6中任一項所述方法得到的維生素B1過所述醋酸纖維膜后進行所述高效液相檢測，得到所述維生素B1的峰面積，根據所述標準曲線，并經折算后即得到所述普通小麥中維生素B1的含量。

8.根據權利要求7所述的測定方法，其特征在于：所述高效液相檢測的條件如下：

色譜柱：Waters XTerra RP18色譜柱；

流動相：A相為甲醇，B相為pH為4.5、摩爾濃度為0.05M的醋酸鈉水溶液；

所述A相與所述B相的體積比為30：70，洗脫方式為等度洗脫；

柱溫為：35℃；

進樣體積為10μL；

流速為0.7mL/min。