[發明專利]去細胞皮瓣及其制備方法和應用在審

申請號：	201710145657.0	申請日：	2017-03-13
公開（公告）號：	CN106693076A	公開（公告）日：	2017-05-24
發明（設計）人：	梅勁;高偉陽;余雅玲;楊良慧;柴益民;魏鵬;陳川;周樂斌	申請（專利權）人：	浙江保爾曼生物科技有限公司
主分類號：	A61L27/60	分類號：	A61L27/60;A61L27/36;A61L27/50
代理公司：	北京超凡志成知識產權代理事務所(普通合伙)11371	代理人：	吳開磊
地址：	310000 浙江省杭州市杭州經濟***	國省代碼：	浙江;33
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摘要：
搜索關鍵詞：	細胞及其制備方法應用
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【說明書】：

技術領域

本發明涉及臨床醫學、生物醫學與再生醫學技術領域，尤其是涉及一種去細胞皮瓣及其制備方法和應用。

背景技術

燒傷、外傷、手術、慢性潰瘍等導致皮膚缺損，而大面積的缺損機體無法自行修復其外觀及功能。缺損創面需要利用皮膚移植物進行覆蓋，目前臨床常用的是自體皮瓣移植。取患者身體其他區域健康的皮膚(供區)，對缺損創面(受區)進行修補。這種方式能有效的覆蓋皮膚缺損創面，但常常造成供區受損。隨著組織工程的發展，大量人工皮膚替代物涌現?，F有的皮膚替代物主要分4類：

一種是去細胞真皮：通過去細胞方法去除細胞成分，保留完整的細胞外基質的異體、異種真皮。但是，此種方法具有如下缺點，如異體皮來源有限；有傳染疾病的危險且受到倫理學的制約；其中異種去細胞真皮修補創面后創面攣縮明顯，創面愈合質量差；結構單薄，無法修復全厚皮膚的缺損；力學性能難于復合操作的要求等。

一種是人工合成真皮：由各種生物、化學材料構建的真皮類似物。但是，此種方法具有如下缺點，如水分易丟失；移植后還要再進行二次表皮移植；結構單薄，無法修復全厚皮膚的缺損等。

另一種是復合皮替代物：自體刃厚表皮或自體角質形成細胞膜片與真皮替代物在體內體外組合的接近正常皮膚結構的一種皮膚替代物。但是，此種方法具有如下缺點，如Apligraft因含有異體人表皮細胞，存在一定程度的免疫排斥反應；現階段的研究停留在免疫缺陷的裸鼠模型中；缺少皮下組織的結構，無法修復深層皮膚缺損等。

還有一種是去細胞皮瓣：去細胞皮瓣的研究始于2010年，其主要制備方法是血管灌注法。目前現有的去細胞皮瓣的制備方法大致分為以下三種，第1種方法最先報道，具體方法不詳，其制備過程中涉及疊氮鈉有毒；第2種方法于2015年報道，以灌注法為主，同時輔以振蕩法，耗時比較長；第3種方法于2016年報道，灌注NaCl、胰酶、Triton X－100、超純水等，步驟繁瑣，耗時較長。

因此，開發一種能夠實現全厚皮膚及皮下組織缺損的修復，無免疫排斥反應，不涉及劇毒有害化學物質，操作步驟簡單，灌注耗時短，且具有良好的細胞相容性及組織相容性的去細胞皮瓣尤為重要。

有鑒于此，特提出本發明。

發明內容

本發明的第一個目的在于提供一種去細胞皮瓣的制備方法，以緩解現有技術中存在的操作步驟繁瑣，耗時長的技術問題。

本發明的第二個目的在于提供一種去細胞皮瓣，以緩解現有技術中存在的包含有毒害化學物質，使受體產生免疫排斥反應，且細胞相容性及組織相容性較差的技術問題。

本發明的第三個目的在于提供一種去細胞皮瓣在修補缺損創面及科學研究中的應用，以緩解現有技術中不能實現全厚皮膚及皮下組織缺損的修復的技術問題。

本發明提供的去細胞皮瓣的制備方法，包括如下步驟：

取動脈的穿支皮瓣，依次灌注肝素溶液，Triton X－100溶液和SDS溶液；將灌注后的所述穿支皮瓣進行干燥處理、滅菌處理和無菌保存。

進一步地，所述動脈為腹壁淺動脈。

進一步地，所述灌注的速度為20－40mL/h。

進一步地，所述肝素溶液為肝素PBS溶液，所述肝素PBS溶液的濃度為10－20U/mL，所述Triton X－100溶液的濃度為0.3％－2％W/V，所述SDS溶液的濃度為0.1％－1％W/V。

進一步地，所述肝素PBS溶液的灌注時間為4－8h，所述Triton X－100溶液的灌注時間為10－14h，所述SDS溶液的灌注時間為10－14h。