[發明專利]檢測端粒酶的亞甲基藍、上轉換納米粒修飾纖維化紙傳感器及其制備方法

在審

• 申請號: 201710144094.3
• 申請日: 2017-03-06
• 公開（公告）號: CN106940372A
• 公開（公告）日: 2017-07-11
• 發明（設計）人: 傅安辰;朱棟;蘇瑞琳
• 申請（專利權）人: 南京中醫藥大學
• 主分類號: G01N33/574
• 分類號: G01N33/574;G01N21/64
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種檢測端粒酶活性的基于亞甲基藍、上轉換納米粒修飾纖維化紙傳感器，其特征在于纖維化紙規格為15*15mm，厚度為0.54mm，通過兩片正中開有直徑5mm圓孔，15*15mm大小，厚度為2mm的亞克力板材進行夾持固定成紙基板。

2.一種檢測端粒酶活性的基于亞甲基藍、上轉換納米粒修飾纖維化紙傳感器的制備方法，其特征在于制備方法為：

(1)、纖維化紙的預處理：將纖維化紙裁剪成15*15mm大小，浸于100～200mLNaIO₄和LiCl混合溶液中，50～80℃水浴條件下加熱30～90分鐘，反應完成后，用蒸餾水洗滌纖維化紙，30～60℃下干燥，得干燥后的纖維化紙。

(2)、纖維化紙基板的制備：將步驟(1)所制得的纖維化紙用兩片正中開有直徑3～7mm圓孔，15*15mm大小，厚度為2mm的亞克力板材進行夾持固定成紙基板，將制成的紙基板于紫外線下滅菌30～90min。隨后進行纖維化紙基板修飾。

(3)、纖維化紙基板的修飾：在纖維化紙基板中央凹槽滴加10～40μL含氨基修飾的適配體(TS-NH₂)(3-8μM)和NaCNBH₃(20～80mM)的HEPES緩沖液溶液，20～40℃下培育30～90分鐘，培育結束后，先后用PBS緩沖液和蒸餾水洗滌，凍干備用。適配體序列為：TS-NH₂：5’-NH₂(CH₂)₆TTTTTTAATCCGTCGAGCAGAGTT-3’；擴增適配體(TE)：5’-SH(CH₂)₆TT(TTAGGG)₉-3’；捕捉適配體(TC-NH₂)：5’-CCCTAACCCTAAAAAA(CH₂)₃NH₂-3’。

3.一種基于亞甲基藍、上轉換納米粒修飾纖維化紙傳感器對端粒酶活性的檢測方法，其特征在于測試方法為：

取5～10μL1×TRAP緩沖液，3～8μL dNTPs(10mM)溶液，2～3μL核苷酸酶抑制劑(RNase inhibitor)，10～40μL擴增適配體TE(3-8μM)和4～10μL細胞提取溶液于紙基板中央凹槽，在20～40℃條件下孵育60分鐘擴增反應，反應結束后先用pH8.0的Tris-HCl輕輕洗滌三次，再用蒸餾水輕輕洗滌三次，然后滴加10～30μL備好的TC-UCNPs或TC-亞甲基藍溶液于紙基板凹槽中，在37℃條件下孵育20～60分鐘，后用TRAP緩沖溶液輕輕地充分洗滌，37℃下干燥，然后分別進行上轉換熒光強度分析和顏色色度分析。