[發明專利]與激活型肝星狀細胞特異性結合的多肽及制備方法和應用

有效

• 申請號: 201710142600.5
• 申請日: 2017-03-10
• 公開（公告）號: CN106699848B
• 公開（公告）日: 2020-08-21
• 發明（設計）人: 張金娟;田甜;楊勤;陳騰祥;郭曉婷;肖俊;韓冰;謝汝佳;羅新華
• 申請（專利權）人: 貴州醫科大學
• 主分類號: C07K7/06
• 分類號: C07K7/06;C07K1/04;G01N33/68
• 代理公司: 北京聯創佳為專利事務所(普通合伙) 11362
• 代理人: 郭防;王培境

本發明公開了一種與激活型肝星狀細胞特異性結合的多肽，所述多肽的氨基酸序列為Thr?Val?Arg?Thr?Ser?Ala?Asp。還公開了其制備方法和應用。本發明提供的一種與激活型肝星狀細胞特異性結合的多肽，能夠與激活型肝星狀細胞進行特異性結合，親和力高。本發明的制備方法以靜止型肝星狀細胞為吸附細胞、激活型肝星狀細胞為靶細胞，采用噬菌體展示技術進行差減篩選，并最終得到一種與激活型肝星狀細胞結合且具有高度特異性的多肽。本發明制備方法中庫容量大，篩選成功率高，操作簡單，成本低。本發明所得多肽可用于制備肝纖維化診斷試劑或肝纖維化靶向治療藥物中，可以為肝纖維化的早期診斷和靶向治療提供新的有效手段。

技術領域

本發明涉及一種與激活型肝星狀細胞特異性結合的多肽及其制備方法，具體屬于生物技術領域。

背景技術

肝纖維化(hepatic fibrosis)是由各種致病因子所致肝內結締組織異常增生，導致肝內彌漫性細胞外基質(extracellular matrix，ECM)過度沉淀的病理過程。病毒性肝炎、酒精肝、脂肪肝、自身免疫性肝病等多種肝病都可導致肝纖維化發生，是肝纖維化的常見病因。在我國，病毒性肝炎的發病率很高，其他肝病也較為常見，這些疾病的慢性發展通常演化為肝纖維化、肝硬化，甚至導致肝癌，已經成為嚴重影響我國人民健康的重大疾患之一。目前普遍認為慢性肝損傷在肝纖維化階段是可逆轉的，因此如何有效地控制及逆轉肝纖維化，防止其進一步演變具有極其重要的意義。

在對肝纖維化發病機制的研究中發現，肝星狀細胞(hepatic stellate cells，HSCs)激活在肝纖維化病理過程中扮演著關鍵性角色。在慢性肝損傷過程中，肝細胞、肝庫普弗細胞、血小板、內皮細胞等釋放一系列細胞因子使靜止型HSCs激活轉化為激活型HSCs，即肌成纖維細胞樣細胞(myofibroblast-like cells，MFCs)。激活型HSCs分泌大量的膠原蛋白，使Disse間隙的ECM增多；同時上調基質金屬蛋白酶抑制劑(matrixmetalloproteinase inhibitor，MMPI)和組織金屬蛋白酶抑制劑(tissue inhibitor ofmetalloproteinase，TIMP)的表達，使ECM降解減少，導致ECM不斷堆積增加而形成肝纖維化和肝硬化。HSCs的活化是肝纖維化發生發展過程中的中心事件，激活型HSCs是肝纖維化發生發展中的“罪魁禍首”，也是肝纖維化防治的關鍵靶細胞。因此，篩選出一種與激活型肝星狀細胞特異性結合的多肽，顯得尤為必要。

發明內容

為解決現有技術的不足，本發明的目的在于提供一種與激活型肝星狀細胞特異性結合的多肽及制備方法和應用，所得多肽可以與激活型肝星狀細胞特異性結合，其制備方法操作簡單，準確度高；所得多肽可用于制備肝纖維化診斷試劑或肝纖維化靶向治療藥物中。

為了實現上述目標，本發明采用如下的技術方案：

與激活型肝星狀細胞特異性結合的多肽，所述多肽的氨基酸序列為Thr-Val-Arg-Thr-Ser-Ala-Asp。

一種與激活型肝星狀細胞特異性結合的多肽的制備方法，其特征在于：包括以下步驟：(1)靜止型肝星狀細胞與激活型肝星狀細胞培養；(2)以靜止型肝星狀細胞為吸附細胞、激活型肝星狀細胞為靶細胞，采用噬菌體展示技術進行差減篩選；(3)經DNA測序確定目標多肽。