[發明專利]一種戒煙靈中煙堿的手性分析合相色譜串聯質譜法

有效

• 申請號: 201710142381.0
• 申請日: 2017-03-10
• 公開（公告）號: CN106896175B
• 公開（公告）日: 2019-04-12
• 發明（設計）人: 龐永強;費婷;張洪非;姜興益;羅彥波;吳達;戚大偉;李翔宇;朱風鵬;胡少東;付亞寧;陳歡;韓書磊
• 申請（專利權）人: 國家煙草質量監督檢驗中心
• 主分類號: G01N30/06
• 分類號: G01N30/06;G01N30/72
• 代理公司: 鄭州中民專利代理有限公司 41110
• 代理人: 姜振東

1.一種戒煙靈中煙堿的手性分析合相色譜串聯質譜法，其特征在于：將戒煙靈樣品干燥、粉碎和過篩，樣品經過氫氧化鈉溶液浸潤后，采用甲基叔丁基醚和甲醇溶液萃取，萃取液經基質分散固相萃取凈化后，使用手性柱-合相色譜串聯質譜分析，采用峰面積歸一化法定量檢測戒煙靈中S-(-)-煙堿和R-(+)-煙堿的比例，具體步驟如下：

1). 標準溶液的配制：稱取約100.0 mg的S-(-)-煙堿標準品，用甲醇溶液稀釋定容到50 mL棕色容量瓶中，配制成濃度約為2.0 mg/mL的S-(-)-煙堿標準儲備液；稱取約50.0 mg的R-(+)-煙堿標準品，用甲醇溶液稀釋定容到50 mL棕色容量瓶中，配制成濃度約為1.0mg/mL的R-(+)-煙堿標準儲備液；利用S-(-)-煙堿標準儲備液和R-(+)-煙堿標準儲備液稀釋配制S-(-)-煙堿和R-(+)-煙堿濃度分別為100 μg/mL和80 μg/mL的混合標準溶液；

2).戒煙靈樣品的混勻：將戒煙靈樣品置于40 ^oC烘箱中，1小時后將戒煙靈取出，粉碎后過0.45毫米孔徑標準篩；

3). 戒煙靈樣品的萃取：稱取0.3 g已粉碎的樣品于15 mL具塞離心管中，加入2.0 mL5% 的氫氧化鈉溶液，渦旋1 min混勻后靜置10 min浸潤樣品，取10 mL甲基叔丁基醚和甲醇溶液到上述具塞離心管中，并于旋渦混合器上以4000 rpm速度振蕩30 min；甲基叔丁基醚和甲醇的體積比90:10；

4). 萃取液的凈化：取1.5 mL萃取上清液于2 mL內含有基質分散固相萃取材料的凈化離心管中，于旋渦混合器上以4000 rpm振蕩2 min，以10000 rpm離心1 min，取上清液過0.45 μm有機相濾膜后進合相色譜串聯質譜分析；所述的基質分散固相萃取材料含：150 mg無水硫酸鎂，25 mg PSA吸附劑，7.5 mg GCB吸附劑；

5).串聯手性柱-合相色譜串聯質譜法條件：分析柱1為Trefoil CEL1柱，柱長 150 mm，內徑3.0 mm ，固定相粒徑2.5 μm，分析柱2為Chiralcel OD-H液相色譜柱，柱長 250 mm ，內徑4.6 mm ，固定相粒徑5 μm；流動相A為：CO₂，流動相B：含0.05%異丙胺的甲醇；流速為1.1 mL/min；梯度洗脫條件為：0.0 min，97% A；0.5 min，97% A；8.0 min，92% A；10.0 min，92% A；10.2 min，97% A；12.0 min，97% A；柱溫40 ℃；進樣室溫度：10 ℃；進樣體積2 μL；背壓：1600 psi；ISM補償流路流動相為含0.1%甲酸的甲醇，流速為0.3 mL/min，分析時間總計12 min；質譜條件：離子源：電噴霧源，掃描方式為正離子掃描，離子源溫度為300 ℃，電噴霧電壓為5000 V，霧化氣壓力為40 psi；檢測方式：多反應監測；通過對峰面積進行歸一化定量S-(-)-煙堿和R-(+)-煙堿占總煙堿的比例。