[發(fā)明專利]布雷菲德菌素A的4;7-位雙呋咱NO供體取代衍生物及其制備方法和用途

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201710141174.3
• 申請(qǐng)日: 2017-03-10
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN106928213B
• 公開(kāi)（公告）日: 2019-08-30
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李達(dá)翃;華會(huì)明;潘華奇;李占林;田康濤;李佳
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 沈陽(yáng)藥科大學(xué)
• 主分類號(hào): C07D413/14
• 分類號(hào): C07D413/14;C07D313/00;A61K31/4245;A61P35/00
• 代理公司: 沈陽(yáng)杰克知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 21207
• 代理人: 靳玲

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及藥物化學(xué)領(lǐng)域，涉及布雷菲德菌素A-4,7位進(jìn)行修飾的衍生物。具體涉及4,7-位雙呋咱NO供體取代的布雷菲德菌素A衍生物及其制備方法和在制備抗腫瘤藥物中的用途。

背景技術(shù)

布雷菲德菌素A(brefeldin A)是一種大環(huán)內(nèi)酯類抗生素，首次從Penicillium decumbens中分離得到。它具有廣泛的生物學(xué)特性，其中包括抗腫瘤、抗病毒、抗真菌和抗有絲分裂活性等。美國(guó)國(guó)家腫瘤研究院(NCI)的檢測(cè)數(shù)據(jù)顯示，布雷菲德菌素A對(duì)60種腫瘤細(xì)胞系的平均GI₅₀為40nM。布雷菲德菌素A的作用機(jī)制與高爾基體的分解有密切聯(lián)系，高爾基體可逆的分解導(dǎo)致蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)的中斷，進(jìn)而導(dǎo)致高爾基體蛋白質(zhì)重新分布進(jìn)入內(nèi)質(zhì)網(wǎng)。雖然它具有開(kāi)發(fā)為腫瘤化療藥物的潛力，但是較低的水溶性、較差的生物利用度以及在動(dòng)物研究中產(chǎn)生的神經(jīng)毒性都限制了布雷菲德菌素在醫(yī)藥領(lǐng)域的應(yīng)用。因此，開(kāi)發(fā)一種保持生物活性、提高治療特性和低毒的布雷菲德菌素A衍生物一直是醫(yī)藥開(kāi)發(fā)領(lǐng)域的熱點(diǎn)。

NO在腫瘤發(fā)生、發(fā)展和死亡中的作用已成為腫瘤生物學(xué)研究的熱點(diǎn)之一。NO供體型抗腫瘤藥物一般是指NO供體通過(guò)連接基團(tuán)與現(xiàn)有的抗腫瘤藥物(或活性基團(tuán))結(jié)合。呋咱氮氧化物是一類重要的NO供體，不誘導(dǎo)產(chǎn)生耐受性是其優(yōu)點(diǎn)。

本發(fā)明以布雷菲德菌素A為先導(dǎo)化合物，利用拼合原理，選擇能夠產(chǎn)生高濃度NO的呋咱氮氧化物作為NO供體，將其通過(guò)連接基團(tuán)連接到其分子結(jié)構(gòu)的4位和7位上，設(shè)計(jì)并合成了通式為Ⅰ和Ⅱ的NO供體型布雷菲德菌素A衍生物。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明要解決的技術(shù)問(wèn)題是尋找抗腫瘤活性好的NO供體型布雷菲德菌素A衍生物，并進(jìn)一步提供一種以該衍生物作為活性成分的治療腫瘤及其它疾病或病癥的藥物組合物。

為解決上述技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明提供如下技術(shù)方案：

通式Ⅰ或Ⅱ所示呋咱NO供體型布雷菲德菌素A衍生物或其藥學(xué)上可接受的鹽：

其中，m、n分別為1-8的整數(shù)。

優(yōu)選地，m、n分別為1-4的整數(shù)；

更優(yōu)選地，m、n分別為2或3。

本發(fā)明所述化合物優(yōu)選為如下化合物：

本發(fā)明通式Ⅰ或Ⅱ的衍生物可用下列方法制備得到：

將苯硫酚(2)與氯乙酸在堿性條件下反應(yīng)得苯硫乙酸(3)，然后經(jīng)30％H₂O₂氧化生成苯磺酰乙酸(4)。化合物4在發(fā)煙HNO₃存在下加熱環(huán)合成3,4-二苯磺酰基呋咱氮氧化物(5)。化合物5的4-位苯磺酰基被乙二醇或丙二醇取代生成單苯磺?；辉鄣趸镱怤O供體化合物6a和6b?；衔?a或6b再與丁二酸酐、戊二酸酐或鄰苯二甲酸酐經(jīng)DMAP，三乙胺催化反應(yīng)得到NO供體7a-f。將布雷菲德菌素A與過(guò)量的呋咱NO供體7a-f在EDCI/DMAP條件下縮合得目標(biāo)化合物8a-f，柱層析(石油醚：乙酸乙酯為1:1至10:1)得到單體化合物。

具體實(shí)施方式

實(shí)驗(yàn)設(shè)備與試劑

實(shí)驗(yàn)方法

細(xì)胞抑制活性實(shí)驗(yàn)方法

細(xì)胞在37℃、5％CO₂飽和濕度的培養(yǎng)箱中常規(guī)培養(yǎng)。培養(yǎng)液為含10％熱滅活胎牛血清，青霉素100U/mL和鏈霉素100U/mL的RPMI1640細(xì)胞培養(yǎng)基。48h更換培養(yǎng)液，細(xì)胞貼壁后，用0.25％胰蛋白酶消化傳代。實(shí)驗(yàn)用細(xì)胞均處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，臺(tái)盼藍(lán)拒染法表明細(xì)胞活力>95％。

取處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期狀態(tài)良好的細(xì)胞一瓶，加入消化液(0.125％胰蛋白酶+0.01％EDTA)消化，計(jì)數(shù)2～4×10⁴cell/mL，制成細(xì)胞懸液接種于96孔板上，180μL/孔，置恒溫CO₂培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24小時(shí)。換液，加入受試藥物，20μL/孔，培養(yǎng)72小時(shí)。將MTT加入96孔板中，20μL/孔，培養(yǎng)箱中孵育4小時(shí)。吸去上清液，加DMSO，150μL/孔，平板搖床上震蕩10分鐘。用酶聯(lián)免疫監(jiān)測(cè)儀在波長(zhǎng)為570nm處測(cè)定每孔的吸光度，分別計(jì)算各濃度下的細(xì)胞抑制率。

抑制率計(jì)算方法：

藥敏孔相對(duì)OD值＝藥敏孔絕對(duì)OD值﹣空白對(duì)照孔絕對(duì)OD值