[發明專利]一種提高免疫檢測系統靈敏性的方法及使用該方法的裝置

在審

• 申請號: 201710139647.6
• 申請日: 2017-03-06
• 公開（公告）號: CN107643399A
• 公開（公告）日: 2018-01-30
• 發明（設計）人: 張玲;其他發明人請求不公開姓名
• 申請（專利權）人: 廣州佰芮慷生物科技有限公司
• 主分類號: G01N33/558
• 分類號: G01N33/558;G01N33/577
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明涉及生物檢測領域，特別是涉及一種提高免疫檢測系統靈敏性的方法及使用該方法的裝置。

背景技術

1959年，Yalow和Berson將放射性同位素示蹤與免疫反應相結合建立了放射免疫分析法，開創了免疫分析這一嶄新的領域，被公認為痕量分析化學方面的重大突破。此后，一系列免疫分析方法紛紛涌現并不斷發展，如酶聯免疫吸附法、熒光免疫測定法、免疫層析測定法、免疫傳感器測定法等。免疫檢測技術正朝著定量、多組分分析、高靈敏、高特異性、方便快速以及更加經濟適用的方向發展。

簡單、靈敏、有效的檢測技術在疾病診斷、新藥開發、生化防御等領域意義重大。目前，已有眾多提高檢測靈敏性的文獻報道。中國專利CN 01822390.7公開了一種檢測分析物的測試條測試法，該方法是首先對檢測抗體(靶向試劑)進行生物素(配體)化修飾，示蹤顆粒標記了抗生物素抗體(標記物)，這樣在檢測過程中會形成“樹枝狀”結構，使檢測信號得以放大。基于這一原理制備的乙肝表面抗原檢測試紙條較Abbott公司的乙肝表面抗原檢測試紙條更為靈敏。中國專利CN200880132189公開了一種免疫層析測試中信號放大的方法以及使用該方法的免疫層析試劑盒，該方法采用兩種不同粒徑的偶聯物超靈敏檢測靶物質的信號方法，也是采用了樹枝狀信號放大技術。

雖然，有諸多提高靈敏性的文獻報道。理論上，這些方法能夠檢測到1個目標抗原的存在，也就是說，只要有一個目標抗原存在，檢測信號就能放大到很容易被偵測到的程度(放大到最大)，因而，這些方法都有極高的靈敏度。但是，在實際應用中，不可能避免非特異反應(如：背景信號)的發生，因而，這些方法在實際應用中無法區分陰陽性，最終的結果是所有的樣品都為陽性，因而，這些方法沒有實際應用價值。

發明內容

本發明所要解決的技術問題是在保證特異性不降低的前提下，提供一種提高免疫檢測系統靈敏性的方法，用于目標物質的高靈敏檢測。

本發明所要解決的技術問題通過以下技術方案予以實現：

一種提高免疫檢測系統靈敏性的方法，其特征在于，該免疫檢測系統包括位于固相上的抗小分子抗體、小分子標記的捕獲抗體和信號標記的檢測抗體，檢測時形成樹枝狀的“信號標記的檢測抗體-目標抗原-小分子標記的捕獲抗體-目標抗原-信號標記的檢測抗體-目標抗原-小分子標記的捕獲抗體……”復合物，所述抗小分子抗體將該復合物固定于檢測區域。

進一步地，所述小分子是任意一種能對抗體進行標記的化學分子。

進一步地，所述小分子是異硫氰酸熒光素、生物素、或地高辛中的一種。

進一步地，所述信號標記是顆粒標記或酶標記。

進一步地，所述抗小分子抗體為抗生物素抗體。

進一步地，所述捕獲抗體與小分子之間的偶聯比為1∶5～1∶40。

進一步地，所述目標抗原為蛋白質、多糖、微生物或核酸等任意一種可被抗體分子特異性結合的物質。

本發明還提供一種免疫層析試紙條，其特征在于，試紙條包括依次搭接粘貼于底板上的樣品墊、結合墊、層析膜、吸水紙；其中，層析膜上檢測線處包被有抗小分子抗體，結合墊上含有小分子標記的捕獲抗體和顆粒標記的檢測抗體。

一種免疫層析試紙條，其特征在于，試紙條包括依次搭接粘貼于底板上的樣品墊、結合墊1、結合墊2、層析膜、吸水紙；結合墊1和結合墊2上分別含有小分子標記的捕獲抗體和顆粒標記的檢測抗體。

一種免疫層析試紙條，其特征在于，試紙條包括依次搭接粘貼于底板上的樣品墊、層析膜、吸水紙；檢測樣品時，將小分子標記的捕獲抗體和顆粒標記的檢測抗體與樣品混合，添加到樣品墊上進行檢測。

一種免疫滲濾卡，其特征在于，滲濾卡檢測點上包被有抗小分子抗體；檢測樣品時，將小分子標記的捕獲抗體和顆粒標記的檢測抗體與樣品混合，添加到免疫滲濾卡加樣孔中進行檢測。

本發明具有如下有益效果：

本發明在檢測時形成樹枝狀的“信號標記的檢測抗體-目標抗原-小分子標記的捕獲抗體-目標抗原-信號標記的檢測抗體-目標抗原-小分子標記的捕獲抗體……”復合物，固相上的抗小分子抗體將該復合物固定于檢測區域，從而給出了良好的信號放大效果，大大提高了靈敏度。較現有信號放大技術相比，優勢在于僅在目標抗原存在的情況下，檢測信號才會得到增強。這樣，在保證特異性的同時，保證了檢測的高靈敏性。同樣，該方法的使用使得可以制造出高靈敏度的免疫層析試試紙條和免疫滲濾卡。

說明書附圖

圖1為本發明信號放大原理圖。