[發明專利]一種脫細胞肺支架及其制備方法

有效

• 申請號: 201710137190.5
• 申請日: 2017-03-09
• 公開（公告）號: CN107096070B
• 公開（公告）日: 2020-08-21
• 發明（設計）人: 黑飛龍;馬金輝;鞠志海;于潔;喬葉薷;候陳瑋;王晨;陳書弘;羅富良
• 申請（專利權）人: 中國醫學科學院阜外醫院
• 主分類號: A61L27/36
• 分類號: A61L27/36
• 代理公司: 北京欣永瑞知識產權代理事務所(普通合伙) 11450
• 代理人: 張慶敏

本發明提供一種脫細胞肺支架，其采用十二烷基醚硫酸鈉聯合DNase Ⅰ溶液進行灌注處理而成。本發明langendorff灌注系統制備出來的脫細胞肺支架細胞去除干凈，三維結構和細胞外基質蛋白保留完整，同種異體皮下移植6周后融合性、細胞化和血管化良好。本發明的制備方法效率高，步驟簡單，可以進行量化生產，在組織工程肺及疏松器官領域有良好的應用前景。

技術領域

本發明涉及組織工程人工肺領域，具體地說，是一種脫細胞肺支架及其制備的方法。

背景技術

目前，由于環境因素、遺傳因素、個人因素等原因，慢性阻塞性肺疾病(COPD)、特發性肺纖維化(IPF)、ɑ-1抗胰蛋白酶缺乏，肺動脈高壓等肺疾病越來越多，對于這些病人來說，肺移植是唯一效果肯定的治療方法。但由于供體嚴重缺乏、免疫排斥反應、疾病傳播、遠期生存率低等原因制約了肺移植的開展。目前每年肺移植全球僅不足3700例，遠遠達不到需求。隨著組織工程學和再生醫學的發展，特別是組織工程皮膚、血管、膀胱、氣管等在臨床上已經成功應用，極大地鼓舞了組織工程人工肺的研究，為肺移植帶來了新的方向。

構建組織工程人工肺的大致流程是首先獲取理想的支架，然后通過種植宿主細胞，進行細胞培養，最后移植到宿主體內，形成一個具有氣體交換功能的人工肺。獲取理想的支架對于后面的細胞種植和體內移植至關重要。

目前，獲取支架的來源有：脫細胞支架、天然支架、人工合成支架、3D打印支架等。其中，脫細胞支架已經廣泛應用于臨床，且不需要服用任何免疫抑制劑，最有前景。

制備脫細胞支架目前常用有震蕩法和灌注法。震蕩法過于劇烈，嚴重破壞了組織的三維結構，不適合結構組織疏松的肺臟。而灌注法是通過灌注去垢劑來制備脫細胞肺支架，最為合適，廣泛應用于組織工程學。目前常用的去垢劑很難充分的去除肺內細胞，同時完美的保留肺臟的三維結構。細胞殘留過多移植后會導致嚴重的免疫排斥反應。另一方面，構成脫細胞支架的內部成分是細胞外基質蛋白，細胞外基質蛋白丟失過多，也會使支架喪失了天然結構和功能，影響細胞化和血管化；呼吸膜破嚴重，氣體交換能力難以維持；移植到體內，受體難以長期存活。

綜上所述，可見對于尋求理想的去垢劑是制備脫細胞肺支架的關鍵之處。

發明內容

為了克服上述技術問題，本發明提供了一種脫細胞肺支架。

本發明的另一目的在于提供一種脫細胞肺支架的制備方法。

為了制備出理想的脫細胞肺支架，本發明是通過以下技術方案來實現的：使用langendorff灌注系統灌注新型去垢劑：十二烷基醚硫酸鈉(sodium lauryl ethersulfate，SLES)，同時聯合灌注DNaseⅠ溶液。本發明首次利用去垢劑SLES制備肺支架，同時對DNaseⅠ的應用方法做了改進。

為了實現上述目的，本發明所述一種脫細胞肺支架，其采用十二烷基醚硫酸鈉(sodium lauryl ether sulfate，SLES)聯合DNaseⅠ溶液進行灌注處理而成。

其中，所述十二烷基醚硫酸鈉(sodium lauryl ether sulfate，SLES)的體積濃度為0.1-1％(ml/ml)。

所述DNaseⅠ溶液的濃度為20-30ug/ml。

十二烷基醚硫酸鈉(sodium lauryl ether sulfate，SLES)溶液與DNaseⅠ溶液的用量體積比約為10-20:1。

優選地，所述脫細胞肺支架采用先經0.1-1％SLES的處理2-3小時；然后再在25℃下將20-30ug/ml DNaseⅠ溶液以流速為1-2ml/min處理0.5-1h。

所述0.1％SLES的用量為0.6-9ml，DNaseⅠ溶液的總用量約為0.6-3.6mg。