[發明專利]一種旱柳枝條皮層葉綠體的制備方法

在審

• 申請號: 201710136377.3
• 申請日: 2017-03-08
• 公開（公告）號: CN107389390A
• 公開（公告）日: 2017-11-24
• 發明（設計）人: 劉俊祥;郎蓬蓬;孫振元;古琳;樊磊;羅棟;翟飛飛
• 申請（專利權）人: 中國林業科學研究院林業研究所
• 主分類號: G01N1/28
• 分類號: G01N1/28
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種旱柳枝條皮層葉綠體的制備方法，包括1)樹皮采集，2)機械勻漿，3)紗布過濾，4)葉綠體粗沉淀制備，5)葉綠體粗沉淀懸浮，6)連續密度梯度液制備，7)等密度離心，8)完整葉綠體回收；其特征在于應用預形成梯度等密度離心法獲得旱柳枝條皮層葉綠體。

2.根據權利要求1所述旱柳枝條皮層葉綠體的制備方法，其特征在于所述1)樹皮采集，是指在生長季清晨從旱柳當年生枝條上取木質部外側的樹皮，4℃避光保存。

3.根據權利要求1所述旱柳枝條皮層葉綠體的制備方法，其特征在于所述2)機械勻漿，是指按照1:10的重量體積比加入勻漿液，慢、快各勻漿2次，每次5秒、間隔1分鐘。

4.根據權利要求1所述旱柳枝條皮層葉綠體的制備方法，其特征在于所述4)葉綠體粗沉淀制備，是指將收集的濾液先在200g下離心，使細胞壁和細胞核沉淀，再取上清液于1500g下離心10min，獲得葉綠體粗沉淀。

5.根據權利要求1所述旱柳枝條皮層葉綠體的制備方法，其特征在于所述6)連續密度梯度液制備，是指將20mL等滲40％Percoll裝入50mL離心管，置于角轉子中40 000g離心1小時，離心機減速設定為No brake。

6.根據權利要求1所述旱柳枝條皮層葉綠體的制備方法，其特征在于所述7)等密度離心，是指將葉綠體粗沉淀懸浮液在連續密度梯度液上方鋪層，置于甩開轉子中16 000g離心30min，離心機加速設定為5，減速為No brake，離心后得到2層致密綠色條帶，上層為破碎葉綠體，下層為完整葉綠體。

7.根據權利要求1所述旱柳枝條皮層葉綠體的制備方法，其特征在于所述8)完整葉綠體回收，是指抽取下層綠色條帶，用3倍體積的懸浮液稀釋，在1500g下離心2min，獲得完整葉綠體沉淀，如用于氧電極測試要立即使用，如用于后續的組學分析可在液氮中保存。