[發明專利]聚集狀態可控且能夠長期保存的細胞核的制備方法

有效

• 申請號: 201710134149.2
• 申請日: 2017-03-08
• 公開（公告）號: CN106868148B
• 公開（公告）日: 2021-02-26
• 發明（設計）人: 殷建;尹煥才;田晶晶;白鵬利;陳名利;王鈞
• 申請（專利權）人: 中國科學院蘇州生物醫學工程技術研究所
• 主分類號: C12Q1/6806
• 分類號: C12Q1/6806
• 代理公司: 北京遠大卓悅知識產權代理有限公司 11369
• 代理人: 韓飛

1.聚集狀態可控且能夠長期保存的細胞核的制備方法，其特征在于，包括有：

S1:收集有核細胞樣品，洗滌，離心去上清，加入裂解液裂解；

S2:加入蔗糖溶液，在15000-40000g、4℃下離心；

S3:取上清，將所得細胞核加入到-20℃預冷的固定液1中進行交聯；

S4:交聯2天后，將固定液1置換為固定液2，即獲得聚集狀態可控且能夠長期保存的細胞核；

其中，所述固定液1包括：

甲醇或乙醇，甲醇或乙醇用于固定細胞核中的染色質，保護其內的DNA穩定，并實現細胞核的聚集；

牛血清白蛋白或胎牛血清或甘油，血清、蛋白或甘油防止核膜在震蕩中破碎；

0.05-0.08%的乙基麥芽酚，能延長儲存期；

0.3-0.5%的糠醛，有很強的殺菌能力；

水；

所述固定液2包括：

戊二醛或甲醛，其中戊二醛或甲醛主要用于維持細胞核聚集狀態；

牛血清白蛋白或胎牛血清或甘油；

水；

所述蔗糖溶液包括有1.5-2.2M的蔗糖、0.5-2%的甘油、0.1-0.5%的甘氨酸和0.01M的PBS緩沖液，1.5-2.2M的蔗糖溶液濃度及離心速度保證細胞核與細胞質膜成分的分離，并保護過程中核膜及其內DNA的完整；甘油是核膜穩定劑，甘氨酸對核膜穩定性起保護作用。

2.如權利要求1所述的聚集狀態可控且能夠長期保存的細胞核的制備方法，其特征在于，所述裂解液包括有0.1-0.5%的曲拉通X-100、0.1-2μM的二硫蘇糖醇、0.1-1μM的苯甲基磺酰氟、0.5-2%的乙基苯基聚乙二醇、30-60mM的檸檬酸鈉或三羥甲基氨基甲烷和0.01-0.1(v/v)%的DMSO。

3.如權利要求1所述的聚集狀態可控且能夠長期保存的細胞核的制備方法，其特征在于，所述固定液1中包括有70-80%的甲醇或乙醇、1-10%的牛血清白蛋白或胎牛血清或甘油。

4.如權利要求1所述的聚集狀態可控且能夠長期保存的細胞核的制備方法，其特征在于，所述固定液2中包括有2%的戊二醛或1%的甲醛、1-10%的牛血清白蛋白或胎牛血清或甘油。