[發(fā)明專利]凈化伏馬毒素B1、黃曲霉毒素、赭曲霉毒素A、玉米赤霉烯酮免疫吸附劑及復(fù)合親和柱

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201710134053.6
• 申請(qǐng)日: 2017-03-07
• 公開（公告）號(hào): CN106977600B
• 公開（公告）日: 2019-08-13
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李培武;胡小風(fēng);張兆威;張奇;張文;唐曉倩
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院油料作物研究所
• 主分類號(hào): C07K16/14
• 分類號(hào): C07K16/14;G01N33/577;G01N30/02;B01J20/286;B01D15/22;B01D15/20
• 代理公司: 湖北武漢永嘉專利代理有限公司 42102
• 代理人: 喬宇

1.伏馬毒素B₁、黃曲霉毒素、赭曲霉毒素A、玉米赤霉烯酮抗體免疫吸附劑，其特征在于：所述的免疫吸附劑包括固相載體和與該固相載體上偶聯(lián)的伏馬毒素B1單克隆抗體、黃曲霉毒素單克隆抗體、赭曲霉毒素A單克隆抗體、玉米赤霉烯酮單克隆抗體，所述的伏馬毒素B₁抗體為由保藏編號(hào)為CCTCC NO.C201636的雜交瘤細(xì)胞株Fm7A11分泌產(chǎn)生的單克隆抗體，所述的雜交瘤細(xì)胞株Fm7A11已于2016年3月29日保藏于中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏地址是，中國(guó)，武漢，武漢大學(xué)，保藏編號(hào)為CCTCC NO.C201636。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的伏馬毒素B₁、黃曲霉毒素、赭曲霉毒素A、玉米赤霉烯酮抗體免疫吸附劑，其特征在于：所述固相載體為瓊脂糖凝膠。

3.裝載有權(quán)利要求1所述的伏馬毒素B₁、黃曲霉毒素、赭曲霉毒素A、玉米赤霉烯酮抗體免疫吸附劑的伏馬毒素B₁、黃曲霉毒素、赭曲霉毒素A、玉米赤霉烯酮復(fù)合親和柱。

4.權(quán)利要求3所述的伏馬毒素B₁、黃曲霉毒素、赭曲霉毒素A、玉米赤霉烯酮復(fù)合親和柱的制備方法，其特征在于：包括以下步驟：

a) 基質(zhì)制備

將CNBr活化的瓊脂糖凝膠基質(zhì)粉末在pH2-3的條件下用HCl洗滌除雜；

b) 配體偶聯(lián)

使用偶聯(lián)緩沖液溶解待偶聯(lián)的伏馬毒素B1單克隆抗體、黃曲霉毒素B1單克隆抗體、赭曲霉毒素A單克隆抗體、玉米赤霉烯酮單克隆抗體，獲得抗體溶液，迅速將步驟a) 活化的瓊脂糖凝膠基質(zhì)轉(zhuǎn)移到上述抗體溶液中，室溫條件20-25℃下充分混勻上述混和物2-4h；

c) 配體封閉

封閉所有殘留的活性基團(tuán)；

d) 除去偶聯(lián)后未偶聯(lián)上的多余的配體；

e) 裝柱。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的制備方法，其特征在于：所述步驟a）中洗滌用HCl濃度為1mmol/L，洗滌時(shí)間為15min。

6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的制備方法，其特征在于：步驟b）中的偶聯(lián)緩沖液為0.2mol/LNa₂HCO₃，pH8.3，每個(gè)抗體溶液濃度為10-15 mg/mL。

7.根據(jù)權(quán)利要求4所述的制備方法，其特征在于：步驟c）的配體封閉過(guò)程為：轉(zhuǎn)移經(jīng)步驟b) 處理的瓊脂糖凝膠基質(zhì)至0.1mol/LTris-HCl緩沖液中，室溫條件下靜置2-4h。

8.根據(jù)權(quán)利要求4所述的制備方法，其特征在于：步驟d）為：依次用pH值為4和pH值為8的緩沖液對(duì)經(jīng)步驟c)處理后的瓊脂糖凝膠基質(zhì)進(jìn)行洗滌，至少洗滌3個(gè)循環(huán)；

pH值為4和pH值為8的緩沖液分別選0.1mol/L 醋酸/ 醋酸鈉緩沖液和0.1mol/L Tris-HCl緩沖液。

9.根據(jù)權(quán)利要求4所述的制備方法，其特征在于：步驟e）為用5倍所述瓊脂糖凝膠體積的0.01％ NaN3-PBS洗滌，并使用0.01％ NaN3-PBS保存，然后裝柱。

10.基于權(quán)利要求3所述的復(fù)合親和柱檢測(cè)伏馬毒素B1、黃曲霉毒素、赭曲霉毒素A和玉米赤霉烯酮含量的方法，其特征在于：將待測(cè)樣品通過(guò)權(quán)利要求3所述的伏馬毒素B₁、黃曲霉毒素、赭曲霉毒素A、玉米赤霉烯酮復(fù)合親和柱，免疫吸附劑會(huì)特異性的吸附伏馬毒素B1、黃曲霉毒素、赭曲霉毒素A和玉米赤霉烯酮，其他的雜質(zhì)則流出伏馬毒素B₁、黃曲霉毒素、赭曲霉毒素A、玉米赤霉烯酮復(fù)合親和柱，然后用色譜級(jí)甲醇洗脫親和柱，收集洗脫液即凈化濃縮后的樣品供高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀檢測(cè)，得各毒素含量。