[發明專利]用于抑制松材線蟲基因表達的成套試劑與方法

有效

• 申請號: 201710133784.9
• 申請日: 2017-03-08
• 公開（公告）號: CN106755055B
• 公開（公告）日: 2020-07-24
• 發明（設計）人: 劉倩;簡恒;王夢;陳永攀
• 申請（專利權）人: 中國農業大學
• 主分類號: C12N15/80
• 分類號: C12N15/80;C12N1/15;A01N63/30;A01P5/00
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 關暢

本發明公開了用于抑制松材線蟲基因表達的成套試劑與方法。本發明公開的成套試劑為成套試劑1和成套試劑2，成套試劑1由成套試劑A與降低hsp基因表達的核酸分子組成，成套試劑A由pDE3dBH.qa載體、粗糙脈孢菌dcl?1^?/dcl?2^?和pBT6質粒組成，成套試劑2由成套試劑A與降低cyc基因表達的核酸分子或降低tmy基因表達的核酸分子組成。實驗證明，利用本發明的成套試劑與方法可以成功抑制松材線蟲靶標基因(hsp、tmy和cyc基因)的表達，進一步可以降低其抗高溫敏感性和抑制其運動活性。

技術領域

本發明涉及生物技術領域中，用于抑制松材線蟲基因表達的成套試劑與方法。

背景技術

松材線蟲是國內外檢疫性病原物，隨著其大范圍的傳播，對我國松林造成嚴重威脅。RNA干擾技術(RNAi)在植物寄生線蟲基因功能的研究中得到廣泛應用，在應用RNAi技術研究松材線蟲基因功能時以浸泡法較為普遍，但其成本昂貴，且不能連續干擾。目前急需一種簡單的干擾松材線蟲基因表達的方法。

發明內容

本發明所要解決的技術問題是如何降低松材線蟲靶標基因的表達以及如何降低松材線蟲高溫敏感性和抑制松材線蟲運動活性。

為解決上述技術問題，本發明首先提供了可用于降低松材線蟲高溫敏感性或降低松材線蟲hsp基因的表達的成套試劑，將該成套試劑命名為成套試劑1。

本發明所提供的成套試劑1，由成套試劑A與hsp基因片段組成；所述成套試劑A包括pDE3dBH.qa載體和粗糙脈孢菌；所述hsp基因片段為名稱為hsp-AC和/或hsp-BC的核酸分子；

所述hsp-AC為如下a1)-a3)中任一種：

a1)序列表中序列1的第7-425位所示的cDNA分子或DNA分子；

a2)與a1)限定的核苷酸序列具有75％或75％以上同一性，且具有相同功能的cDNA分子或DNA分子；

a3)在嚴格條件下與a1)限定的核苷酸序列雜交，且具有相同功能的cDNA分子或DNA分子；

所述hsp-BC為如下b1)-b3)中任一種：

b1)序列表中序列2的第7-285位所示的cDNA分子或DNA分子；

b2)與b1)限定的核苷酸序列具有75％或75％以上同一性，且具有相同功能的cDNA分子或DNA分子；

b3)在嚴格條件下與b1)限定的核苷酸序列雜交，且具有相同功能的cDNA分子或DNA分子。

上述成套試劑1中，所述成套試劑A還可包括pBT6質粒。

上述成套試劑1中，所述成套試劑A可僅由所述pDE3dBH.qa載體和所述粗糙脈孢菌組成，也可由所述pDE3dBH.qa載體、所述粗糙脈孢菌和所述pBT6質粒組成。

上述成套試劑1中，所述粗糙脈孢菌可為粗糙脈孢菌株dcl-1^-/dcl-2^-。

為解決上述技術問題，本發明還提供了可用于抑制松材線蟲運動活性或降低松材線蟲cyc基因或tmy基因的表達的成套試劑，將該成套試劑命名為成套試劑2。

本發明所提供的成套試劑2，為成套試劑甲或成套試劑乙；所述成套試劑甲由所述成套試劑A與cyc基因片段組成；

所述cyc基因片段為名稱為cyc-AC和/或cyc-BC的核酸分子；

所述cyc-AC為如下c1)-c3)中任一種：

c1)序列表中序列3的第7-334位所示的cDNA分子或DNA分子；