[發(fā)明專利]冬蟲夏草菌絲體培養(yǎng)方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201710133641.8
• 申請日: 2017-03-08
• 公開（公告）號: CN106867916A
• 公開（公告）日: 2017-06-20
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 陳瑞真;陳箐
• 申請（專利權(quán)）人: 西安漢瑞寶生物工程有限公司
• 主分類號: C12N1/14
• 分類號: C12N1/14;C12R1/645
• 代理公司: 西安新思維專利商標事務(wù)所有限公司61114
• 代理人: 黃秦芳

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種冬蟲夏草菌絲體培養(yǎng)方法。

背景技術(shù)

冬蟲夏草是生長在青藏高原及其邊緣地帶海拔3000—6000m的高寒草甸地區(qū)的麥角菌科真菌寄生在鱗翅目蝙蝠蛾幼蟲體內(nèi)而生長的一類真菌類中藥材，屬中國名貴傳統(tǒng)的滋補強壯藥材。冬蟲夏草這種真菌生長具有極其苛刻的寄生性和特殊的生態(tài)環(huán)境，天然資源原本就十分稀少，加之近年來生態(tài)環(huán)境的破壞、青藏高原溫度上升，使冬蟲夏草資源銳減，現(xiàn)已處瀕臨滅絕邊緣，根本無法滿足人們保健和用藥的要求。所以國內(nèi)外眾多研究機構(gòu)就冬蟲夏草的人工栽培、冬蟲夏草菌絲體生產(chǎn)、成分、藥理等方面都進行了大量的研究開發(fā)工作。本發(fā)明人也是自1993年開始至今仍在開展冬蟲夏草領(lǐng)域的研究開發(fā)工作。下列專利文獻如《人工培養(yǎng)冬蟲夏草菌粉入藥的方法，公開號CN 1275403A》；《提高冬蟲夏草菌絲體發(fā)酵收率的培養(yǎng)基及其制備方法，公開號CN 1670181A》；《一種用于生產(chǎn)冬蟲夏草菌絲體的培養(yǎng)基，公開號CN 101096641A》；《冬蟲夏草菌絲體與子實體的栽培方法，公開號CN 101843196A》等都對人工培養(yǎng)冬蟲夏草菌絲體方法、工藝及其應(yīng)用進行了研究。綜上所有專利文獻看，無論是固體發(fā)酵還是液體發(fā)酵的培養(yǎng)基組合中給蟲草菌絲體生長提供氮源的成分不外乎是骨蛋白粉、蠶蛹粉、牛奶粉、蛋白胨等。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供一種冬蟲夏草菌絲體培養(yǎng)方法，采用人工飼養(yǎng)的無菌家蠅的活體幼蟲——蠅蛆經(jīng)凍干、粉碎技術(shù)制成的蠅蛆凍干粉作為發(fā)酵蟲草菌絲體的氮源，大大提高了冬蟲夏草菌絲體的收率及冬蟲夏草菌絲體的藥用營養(yǎng)成分含量。

本發(fā)明所采用的技術(shù)方案為：

冬蟲夏草菌絲體培養(yǎng)方法，其特征在于：

由以下步驟實現(xiàn)：

工業(yè)生產(chǎn)前期：

將冬蟲夏草菌種轉(zhuǎn)接到傳統(tǒng)的PDA斜面上，在24-25℃下培養(yǎng)5天；

然后挑取完整的白色致密絮狀菌絲轉(zhuǎn)接到適應(yīng)性斜面培養(yǎng)基進行適應(yīng)性育種，在24-25℃下培養(yǎng)5天；

然后再挑取完整的白色致密絮狀菌絲再轉(zhuǎn)接到適應(yīng)性斜面培養(yǎng)基進行適應(yīng)性育種；

如此重復(fù)適應(yīng)性育種三次，最后生產(chǎn)出適應(yīng)于發(fā)酵培養(yǎng)基生產(chǎn)用的菌種；

所述適應(yīng)性斜面培養(yǎng)基為：在土豆汁1000ml中，加入葡萄糖15-20g、玉米粉0-2g、蠅蛆凍干粉1-10g、蛋白胨1-10g、硫酸鎂0.5-2g、磷酸二氫鉀0.5-2g、維生素B₁ 0.1-1.5g、瓊脂粉15-20g，煮沸，補水定容于1000ml；蠅蛆凍干粉用量自1g開始，每代增加1-5g，直至適應(yīng)性斜面培養(yǎng)基中蠅蛆凍干粉用量達3-10g；

所述發(fā)酵培養(yǎng)基的配方為：以質(zhì)量百分比計，大米45-50%，玉米粉2%，土豆汁15-20%，蠅蛆凍干粉20-35%，硫酸鎂0.01-0.03%、磷酸二氫鉀0.01-0.03%，維生素B₁ 0.003-0.005%，其余為水；

所述土豆汁是將經(jīng)削皮挖眼切片后的100-200克土豆用1000ml水煮爛，取其濾液，補水定容于1000ml后得到的；

工業(yè)化生產(chǎn)中：

將發(fā)酵培養(yǎng)基裝入玻璃發(fā)酵瓶中，在121℃下滅活40分鐘，放冷，采用無菌接種技術(shù)將生產(chǎn)菌種接入，置18-25℃下培養(yǎng)30-45天，即得充滿白色致密菌絲體的絮狀物。

本發(fā)明具有以下優(yōu)點：

1、本發(fā)明中，發(fā)酵培養(yǎng)基的生物利用率達95%以上：發(fā)酵培養(yǎng)基幾乎是100%轉(zhuǎn)變成白色致密菌絲體的絮狀物。

2、工藝簡單易行，整個生產(chǎn)過程中不需要進行菌絲體與培養(yǎng)基的分離，這一點與傳統(tǒng)的菌絲體發(fā)酵工藝大大的不同，使本發(fā)明提供的工藝簡單易行，質(zhì)量易于掌控。

3、本發(fā)明提供的發(fā)酵培養(yǎng)基培養(yǎng)獲得的冬蟲夏草菌絲體所含的藥用營養(yǎng)成分遠遠高于野生冬蟲夏草。

具體實施方式

下面結(jié)合具體實施方式對本發(fā)明進行詳細的說明。

本發(fā)明涉及到一種從冬蟲夏草上分離的菌種——蝙蝠娥擬青霉的新型培養(yǎng)基，采用人工飼養(yǎng)的無菌家蠅的活體幼蟲——蠅蛆經(jīng)凍干、粉碎技術(shù)制成的蠅蛆凍干粉作為發(fā)酵生產(chǎn)蟲草菌絲體的氮源，即首次使用了人工飼養(yǎng)的家蠅幼蟲作為氮源。本發(fā)明涉及到一種中國冬蟲夏草菌（拉丁學(xué)名為Cordyceps sinensis）的無性型——蝙蝠娥擬青霉（拉丁學(xué)名為Paecilomyces hepiali Chen & Dai,）采用固體發(fā)酵工藝生產(chǎn)冬蟲夏草菌絲體的生產(chǎn)方法，具體說是涉及生產(chǎn)過程中一種新型的培養(yǎng)基配方。