[發明專利]一種制備甘草酸和甘草異黃酮乙的方法

在審

• 申請號: 201710133369.3
• 申請日: 2017-03-08
• 公開（公告）號: CN106946969A
• 公開（公告）日: 2017-07-14
• 發明（設計）人: 魏蕓;邵倩
• 申請（專利權）人: 北京化工大學
• 主分類號: C07J63/00
• 分類號: C07J63/00;C07H15/256;C07H1/08;C07D311/36;C07D311/40
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技術領域

本發明涉及一種采用三液相浮選與高效制備液相色譜儀聯用，從中藥材甘草中分離純化甘草酸和甘草異黃酮乙的方法。

背景技術

甘草是一味古老的植物藥，在中國、希臘和印度的古代醫藥中均有記載，至今已有幾千年的醫用歷史，臨床用于治療免疫系統、呼吸系統、消化系統等多種疾病。到目前為止，從甘草中分離得到的化合物已有400多種，其中的生物活性成分（例如三萜皂苷、黃酮及酚類化合物）均表現出抗炎、抗菌、抗氧化、抗HIV等重要的藥理作用。

目前，針對甘草中有效成分提取工藝的研究已有大量報道，但同時針對其中幾種具體成分進行分離純化的研究仍然較少。作為一種中藥材，甘草常以煎煮取湯的方式獲得其有效成分。然而，對于煎煮獲得的大量水提液而言，常規的前處理方法（溶劑萃取、吸附技術和溶劑蒸發等）需要大量的有機試劑，不僅耗時且成本較高。因此，選用一種操作簡單、高效、有機試劑消耗少、綠色環保的前處理方法顯得尤為重要。

針對大量水樣的處理問題，溶劑浮選技術具有獨特的優勢。其原理在于，水樣中待分離物質由于較小的表面張力易附著在氣泡表面，在自下而上的氣流帶動下，隨氣泡逐漸上升至浮選柱頂部，氣泡于相與相之間的界面處破裂，待分離物質即溶解于與其極性、密度等性質相近的溶劑中，從而達到分離的效果。溶劑浮選技術具有操作簡便、分離過程溫和、分離效率高、富集系數高和有機溶劑消耗量低等優點，廣泛用于天然產物中活性物質分離、樣品前處理、水中有機污染物分離等領域。

結合三液相萃取技術，在傳統的兩相溶劑浮選基礎上加以改進，本發明首次提出了三液相浮選技術。它采用極性較小的有機溶劑為上相，聚合物溶液為中間相，較高鹽濃度的甘草水提液為下相。由于三相極性的差異，在浮選過程中，水相中待分離物質根據相似相容原理，富集在與其極性相近的不同相中，從而實現分離富集。三液相浮選技術可初步實現極性相差較大的目標物的分離，減少后續的純化步驟步驟，節能環保。

本發明建立了三液相浮選-高效制備液相分離純化甘草中甘草酸和甘草異黃酮乙的方法。該方法操作簡單，簡便易行，且過程溫和，分離效率高，對甘草酸和甘草異黃酮乙的分離純化具有實際意義，也為天然產物有效成分的分離純化提供了新的思路。

發明內容

本發明的目的是通過水提法從甘草中獲得目標成分，然后通過三液相浮選和高效制備液相色譜分離純化，得到甘草酸和甘草異黃酮乙，純度分別為93%、和95%以上。

本發明的方案是：通過水提法獲得的甘草樣品經三液相浮選進行分離富集，再通過高效制備液相色譜分離制備高純度甘草酸和甘草異黃酮乙。選擇三液相浮選溶劑體系，有三個組分構成，A組分是甘草水提液（加鹽），B組分是PEG1000水溶液（w:w=1:1），C組分是乙酸乙酯。A作為下相，B作為中相，C作為上相，調節A:B:C三組分的體積比為600-200:10-30:10-30，溶液pH為7，鹽濃度為250-400 g/L，氮氣流速為20-60 mL/min，浮選時間20-60 min，經過一次浮選實現甘草酸和甘草異黃酮乙的初步分離。

首先在浮選柱中加入上述三液相浮選體系，然后調節氮氣流速，開始浮選。浮選結束后收集上相和中相樣品，采用高效制備液相色譜儀（島津），包括：LC-6AD高壓輸液泵（兩個）；SPD-20A二極管陣列檢測器；CBM-20A 中央系統控制器；LC-solution工作平臺。色譜柱選擇YMC-Pack ODS-A制備柱（250 mm × 20 mm I.D., 5 μm）；紫外檢測波長250 nm；柱溫為室溫；流動相為 A：乙腈，B：水；流速8 mL/min。分離中相樣品時，進樣量0.5-1.5 mL，0-25 min，21%-21% A；25-30 min，21%-45% A；30-50 min，45%-55% A。分離上相樣品時，進樣量0.2-0.7 mL，0-10 min，50%-60% A；10-22 min，60%-60% A；22-52 min，60%-75% A。

通過本方法獲得的甘草酸和甘草異黃酮乙的純度分別高達93%和95%以上。適用于三液相浮選與各種型號的高效制備液相色譜儀聯用，從甘草水提液中分離制備甘草酸和甘草異黃酮乙單體。