[發明專利]一種測定甘蔗梢腐病病菌致病力的方法

在審

• 申請號: 201710132452.9
• 申請日: 2017-03-07
• 公開（公告）號: CN107012197A
• 公開（公告）日: 2017-08-04
• 發明（設計）人: 林善海;王澤平;羅霆;李毅杰;黃誠華
• 申請（專利權）人: 廣西壯族自治區農業科學院甘蔗研究所
• 主分類號: C12Q1/04
• 分類號: C12Q1/04;C12Q1/24;C12R1/77
• 代理公司: 北京中譽威圣知識產權代理有限公司11279
• 代理人: 朱志寬,李秋琦

技術領域

本發明涉及一種測定甘蔗梢腐病病菌致病力的方法。

背景技術

甘蔗梢腐病是甘蔗生產上的一種重要真菌性病害，主要侵染甘蔗嫩梢，導致甘蔗葉片腐爛，甚至植株死亡，對甘蔗品種造成產量和含糖量的顯著下降。甘蔗梢腐病在我國普遍發生，幾乎所有的甘蔗品種均可感染梢腐病，感病品種梢腐病發病率可達到38％以上，導致甘蔗減產5％-20％，甘蔗糖分降低達3％。甘蔗梢腐病(Pokkah Boeng)是由多種鐮刀菌引起的一種甘蔗葉部病害，病原菌為藤倉赤霉病菌復合種(Gibberella fujikuroi complex)，無性態至少包括Fuarium sacchri、F.proliferatum、F.verticillioides、F.subglutinan和F.andiyazi等5種鐮刀菌。應用抗病優良品種是有效控制甘蔗梢腐病的科學途徑。甘蔗梢腐病的抗病育種首先需要大量篩選病原菌株，并獲得強致病力的病原菌株，從而利用強致病力菌株對甘蔗品種及種質資源進行篩選和評價。

公開于該背景技術部分的信息僅僅旨在增加對本發明的總體背景的理解，而不應當被視為承認或以任何形式暗示該信息構成已為本領域一般技術人員所公知的現有技術。

發明內容

本發明的目的在于提供一種簡易、精準、有效、重復性好的離體測定甘蔗梢腐病病菌致病力的方法。使得甘蔗葉片樣本的采集和測定不受栽培季節以及苗齡的影響。

為實現上述目的，本發明提供了一種測定甘蔗梢腐病病菌致病力的方法，包括以下步驟：

(1)將甘蔗梢腐病菌接種在PDA培養基平板上，25-28℃培養3-5天；

(2)選擇甘蔗梢腐病感病品種，采集新鮮甘蔗葉片，清洗葉片，將葉片剪成片段，在葉片中間葉脈兩側刺傷，取甘蔗梢腐病菌的菌塊接種在刺傷部位，以長有菌絲的一面貼在傷口處；

(3)將接菌的甘蔗葉片置于培養皿中，噴灑無菌水，于室溫條件下放置3-5天；

(4)觀察和測量病斑的長度，沿著葉脈方向測量黃色暈圈的長度，以病斑的長度區分病原菌致病力的強弱。

優選地，上述技術方案中，所述步驟(2)中采集新鮮甘蔗葉片為，從心葉往下數第2至第4張完全展開葉片。

優選地，上述技術方案中，所述步驟(2)中葉片剪成的片段長度為10-14cm。

優選地，上述技術方案中，所述步驟(2)中取菌塊為，用滅菌的移液器槍頭挖取菌塊，菌塊直徑為5-6mm。

優選地，上述技術方案中，所述步驟(3)中噴灑無菌水的量為3-5ml。

優選地，上述技術方案中，所述步驟(3)中培養皿選用直徑為15cm。

與現有技術相比，本發明具有如下有益效果：本發明測定甘蔗梢腐病病菌致病力的方法，采用離體接種測定甘蔗梢腐病菌的致病力，甘蔗葉片樣本的采集不受甘蔗苗齡、種植時期的影響，測定條件易控制。甘蔗離體葉片在保溫保濕條件下可在一定時間內不干枯，保證了病原菌的侵染。本發明方法能夠簡易、精準、有效且重復性好的測定甘蔗梢腐病病菌致病力。

具體實施方式

下面結合具體實施例，對本發明的具體實施方式進行詳細描述，但應當理解本發明的保護范圍并不受具體實施方式的限制。

實施例

一種測定甘蔗梢腐病病菌致病力的方法，包括以下步驟：

1、接種體的制備

分別培養甘蔗梢腐病病原鐮刀菌。具體為：分別將甘蔗梢腐病病原菌接種在PDA培養基平板上活化3天，挑取邊緣菌絲接種新的PDA培養基平板上，25-28℃培養3-5天，用滅菌的1mL移液器槍頭(寬口的一端)挖取菌絲塊(直徑約5-6mm)，待用。

2、接種材料的處理

選擇生產上表現為甘蔗梢腐病感病品種GT37，抗病品種ROC22和中感材料GT08-120，采集新鮮甘蔗葉片(從心葉往下數第2至第4張完全展開葉片)，用清水沖洗干凈表面的塵土，晾干，剪成約12cm的片段。

3、接種

用大頭針在葉片中間葉脈兩側刺傷，按照約3×3mm的方式共刺4針。取甘蔗梢腐病菌菌塊，接種在刺傷部位，以長有菌絲的一面貼在傷口處，菌碟完全蓋住刺傷口。每個菌株分別在10張葉片葉脈的一側接種，另一側以接純PDA培養基為對照。將接菌的甘蔗葉片至于直徑15cm的玻璃培養皿中，噴灑適量的無菌水(約3-5mL)。于室溫條件(25-28℃)下放置3-5天。

4、病情調查

觀察和測量病斑的長度。沿著葉脈方向測量黃色暈圈的長度，去除一個最高值和一個最低值，以剩余數值的平均值代表該病原菌致病力的強弱。