[發明專利]一種鴨嘴獸來源的降鈣素及其應用

在審

• 申請號: 201710131391.4
• 申請日: 2017-03-07
• 公開（公告）號: CN106866811A
• 公開（公告）日: 2017-06-20
• 發明（設計）人: 蔡在龍;楊生生;胡杰偉;陳圓圓;俞瑾;李安吉
• 申請（專利權）人: 中國人民解放軍第二軍醫大學
• 主分類號: C07K14/585
• 分類號: C07K14/585;C07K1/20;C07K1/06;C07K1/04;A61K38/23;A61P3/12;A61P3/14;A61P19/08;A61P19/10;A61P29/00
• 代理公司: 上海元一成知識產權代理事務所(普通合伙)31268
• 代理人: 趙青

1.一種鴨嘴獸來源的降鈣素，其特征在于，具有如下氨基酸序列：

Cys-Ser-Asn-Leu-Ser-Thr-Cys-Val-Leu-Gly-Lys-Leu-Ser-Gln-Glu-Leu-His-Lys-Leu-Gln-Thr-Asn-Pro-Arg-Thr-Asp-Val-Gly-Ala-Gly-Thr-Pro-NH₂，

其中，Pro-NH₂表示脯氨酰胺，第1和第7位上的兩個Cys殘基由一個二硫鍵相連。

2.根據權利要求1所述的鴨嘴獸來源的降鈣素，其特征在于：

其中，所述降鈣素的分子量為3365.86Da，效價為7892IU/mg。

3.一種如權利要求1所述的鴨嘴獸來源的降鈣素的合成方法，其特征在于，采用Fmoc固相合成法進行合成，包括以下步驟：

(1)選擇Rink Amide MBHA樹脂作為固相載體，用Fmoc保護各種所用氨基酸的α-氨基；

(2)按照降鈣素的氨基酸序列順序，將鴨嘴獸來源降鈣素C端的第一個Fmoc保護氨基酸裝在含Rink Amide MBHA樹脂的反應器中，用六氫吡啶體積分數為20％的六氫吡啶-二甲基甲酰胺室溫處理，除去Fmoc保護基團；

(3)利用N,N-二環己基碳二亞胺作為偶聯劑將Cys與第二個羧基已被活化的Fmoc保護氨基酸形成肽鍵；

(4)在負壓作用下對形成的二肽進行洗滌過濾；

(5)重復步驟(2)～步驟(4)，由C端向N端逐個縮合各被保護的氨基酸，直至達到所要合成的肽鏈長度；

(6)利用三氟乙酸將肽鏈從Rink Amide MBHA樹脂上裂解下來，經過純化處理，得到降鈣素多肽的粗品；

(7)將所述降鈣素多肽的粗品溶解于乙酸-水溶液中，并調節pH至6.0，置于一定溫度下保溫一段時間，使之形成二硫鍵，復性獲得所述鴨嘴獸來源的降鈣素。

4.根據權利要求3所述的鴨嘴獸來源的降鈣素的合成方法，其特征在于，還包括：

采用反相高效液相色譜對所述鴨嘴獸來源的降鈣素進行純化的步驟，采用C18反相柱對所述降鈣素進行純化，流動相A為0.1％TFA-100％H₂O，流動相B為0.1％TFA-100％CNCH₃，流速為1ml/min，線性洗脫梯度為30min內流動相B從20％到90％，接5min內流動相B從90％到100％。

5.根據權利要求3所述的鴨嘴獸來源的降鈣素的合成方法，其特征在于：

其中，在步驟(7)中，所述乙酸-水溶液的濃度為1mg/mL，乙酸和水的體積比為1:19，

采用(NH₄)₂CO₃對溶解有降鈣素多肽粗品的乙酸-水溶液進行pH調節，

所述一定溫度為37℃，所述一定時間為4h。

6.權利要求1或2所述的鴨嘴獸來源的降鈣素在制備調節體內鈣、磷代謝的藥物中的用途。

7.根據權利要求6所述的鴨嘴獸來源的降鈣素在制備調節體內鈣、磷代謝的藥物中的用途，其特診在于：

其中，所述調節體內鈣、磷代謝的藥物為抑制破骨細胞功能的藥物、抑制股吸收的藥物、抑制腎小管對鈣、磷、鈉、氯重吸收的藥物或抑制小腸吸收鈣和磷的藥物。

8.權利要求1或2所述的鴨嘴獸來源的降鈣素在制備治療或預防骨代謝和/或鈣代謝紊亂相關疾病的藥物中的用途。

9.根據權利要求8所述的鴨嘴獸來源的降鈣素在制備治療或預防骨代謝和/或鈣代謝紊亂相關疾病的藥物中的用途，其特征在于：

其中，所述治療或預防骨代謝和/或鈣代謝紊亂相關疾病的藥物為治療或預防骨痛癥、骨質疏松癥或佩吉特骨病的藥物。

10.一種含有權利要求1或2所述的鴨嘴獸來源的降鈣素的藥物組合物，其特征在于：

其中，所述藥物組合物還包括可藥用賦形劑、稀釋劑與載體中的任意一種。