[發明專利]與細胞膜標記相關的親和肽

有效

• 申請號: 201710130531.6
• 申請日: 2017-03-01
• 公開（公告）號: CN106831949B
• 公開（公告）日: 2020-06-30
• 發明（設計）人: 顧月清;韓智豪;芮雅蘭
• 申請（專利權）人: 中國藥科大學
• 主分類號: C07K7/08
• 分類號: C07K7/08;C12Q1/02;A61K48/00;A61K38/10;A61P35/00
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本發明發現了一系列與細胞膜標記相關的親和多肽SEQ ID NO：1，這些多肽對細胞膜結合的性質將有可能實現特定惡性腫瘤的近紅外成像，可用于細胞標記、腫瘤診斷或示蹤的藥物的制備、靶向型化療以及用于藥物輔料或連接物，從而達到實時無損在位監測藥物在細胞內進出的目的。本發明涉及與在體動力學監控相關的納米藥物領域，具體涉及多條多肽、其親和細胞試驗以及這些多肽為有效成分的藥物組合物以及它們在制備示蹤藥物中應用。

技術領域

本發明屬于生物工程制藥技術領域和蛋白質多肽類藥物及生物醫學工程領域，具體涉及針對細胞膜具有高親和力多肽及其應用，例如用于納米藥物在體檢測中。

背景技術

細胞膜或稱質膜，在細胞群體的“社會行為”中起著重要作用，諸如細胞間通訊、細胞運動和移行、細胞粘附、與細胞外環境進行物質交換、被機體免疫機制所識別等，無不與質膜的功能有關。惡性腫瘤細胞的許多生長特性及侵襲轉移能力亦均與質膜的改變有關。

與正常細胞相比，腫瘤細胞膜化學組成的一個重要特點是膜磷脂中單不飽和脂肪酸，主要是油酸的含量相對增高，而飽和脂肪酸和多不飽和脂肪酸的含量相對減少。因此膜的流動性增強，硬脂酸與油酸都是18個碳原子的脂肪酸，硬脂酸經酶的作用轉化為油酸，腫瘤細胞膜中油酸增加，故飽和指數降低。

細胞內的物質運輸調控是重大科學難題，也是科學研究的前沿熱點問題。藥物在細胞和亞細胞內的吸收、轉運、分布、結合、代謝、排泄等細胞藥代動力學參數的考察對于藥物的治療效果評價具有重要意義。故迫切需要將傳統的藥代動力學研究從“宏觀”的血漿藥物濃度深入到“微觀”的靶細胞/亞細胞層面，研究藥物在靶細胞上的轉運速率、胞內或細胞器內蓄積量、亞細胞分布與靶向結合，與藥物的靶部位活性進行相關分析，建立PK-PD模型，能夠更準確地預測藥物在人體的藥效。

用于示蹤細胞增殖時，隨著細胞的每一次分裂，細胞膜熒光染料能準確地標記細胞的變化，清晰可視化研究藥物在靶細胞的轉運變化，以及胞內細胞器的積累。.

細胞膜標記技術早在1985年就已經進行了初步發展，DiO/DiD/DiL/DiR屬于長鏈羰花青熒光染料，是一種親脂性膜染料，它在水溶液中熒光極弱，然而當用稀釋的染液標記細胞時，DiO/DiD中的烷基鏈嵌入細胞膜的磷脂雙份子層中，并激發出強烈的綠色/紅色熒光，DiO的最大激發波長是489nm，最大發射波長是501nm，DiD的最大激發波長是644nm，最大發射波長是665nm。DiO在最早的研宄中被用來示蹤神經細胞。用于示蹤細胞增殖時，隨著細胞的每一次分裂，膜染料DiO/DiD的熒光能準確地平分到兩個子代細胞上。DiO/DiD染料具有低熒光變異性、良好的標記穩定性以及極少發生細胞間轉移這些優點，此外，DiO/DiD并不影響標記細胞及后代細胞的增殖，并能通過建立細胞分裂標準曲線定量檢測體內外細胞分裂情況。特別是Dil，廣泛應用于固定和非固定的組織與細胞中，進行順行或逆行的神經示蹤分析。Dil不會影響細胞的活力、生長以及基本生理特性。Dil標記運動神經元，可在培養基條件下持續跟蹤長達四周，在體內長達一年。染料通過在質膜中的緩慢橫向擴散均勻標記神經元，0.2～0.6mm/每天/固定標本，在活體組織里，可以達到6mm/每天。經過醛固定的組織，Dil的擴增可以持續長達1～2年。一般情況下未標記的染料不會向非標記的細胞轉移，除非質膜被破壞，比如切片部位。。

較長的熒光衰減時間，在體檢測時，只能用于長時間標記觀察，藥物代謝時間往往是短時間內完成，長時間的細胞熒光標記不利于機體的正常代謝。Di系列染料雖具有低熒光變異性、良好的標記穩定性、較低細胞毒性以及極少發生細胞間轉移這些優點，但在藥物進行細胞代謝時，標記的細胞功能的完整性受到影響。為了設計用于細胞內藥物監控的細胞膜標記分子，生物分子多肽因其生物活性、標記方便、熒光時效性，成為新的細胞膜標記的選擇。

本發明公開了能高度親和細胞膜的多肽，這些多肽能高效結合細胞膜，從而靶向各種細胞，最終達到標記細胞的效果。這些多肽可制備成藥物進入細胞監控的評價工具。

發明內容