[發明專利]一種篩選棉花抗旱相關基因的方法

有效

• 申請號: 201710130526.5
• 申請日: 2017-03-07
• 公開（公告）號: CN106893780B
• 公開（公告）日: 2019-12-31
• 發明（設計）人: 葉武威;陸許可;陳修貴;王俊娟;舒娜;王德龍;王帥;樊偉莉;郭曉寧;郭麗雪
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院棉花研究所
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12Q1/6858
• 代理公司: 11245 北京紀凱知識產權代理有限公司
• 代理人: 關暢;張立娜

1.一種篩選與棉花抗旱性相關基因的方法，包括如下步驟：

(1)設置如下實驗組和對照組：

實驗組：對待測棉花進行干旱脅迫處理；

對照組：對所述待測棉花不進行干旱脅迫處理；

(2)檢測并比較所述實驗組和所述對照組中所述待測棉花的基因組DNA的甲基化水平和/或模式，找到兩組中甲基化水平和/或模式存在差異的基因，即為或候選為與棉花抗旱性相關基因；

步驟(2)中，采用MSAP技術檢測并比較所述實驗組和所述對照組中所述待測棉花的基因組DNA的甲基化水平和/或模式；

采用MSAP技術檢測并比較所述實驗組和所述對照組中所述待測棉花的基因組DNA的甲基化水平和/或模式時，雙酶切組合為EcoR I/Hpa II和EcoR I/Msp I；

采用MSAP技術檢測并比較所述實驗組和所述對照組中所述待測棉花的基因組DNA的甲基化水平和/或模式時，針對EcoR I的接頭由序列表中序列1和序列2所示的兩條單鏈DNA分子互補配對形成，針對Hpa II和Msp I的接頭由序列表中序列3和序列4所示的兩條單鏈DNA分子互補配對形成；

采用MSAP技術檢測并比較所述實驗組和所述對照組中所述待測棉花的基因組DNA的甲基化水平和/或模式時，針對EcoR I的預擴增引物為序列表中序列5所示單鏈DNA分子，針對Hpa II和Msp I的預擴增引物為序列表中序列6所示單鏈DNA分子；

采用MSAP技術檢測并比較所述實驗組和所述對照組中所述待測棉花的基因組DNA的甲基化水平和/或模式時，針對EcoR I的選擇性擴增引物為序列表中序列7、序列8、序列9和序列10所示單鏈DNA分子，針對Hpa II和Msp I的選擇性擴增引物為序列表中序列11、序列12、序列13和序列14所示單鏈DNA分子。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于：所述棉花為陸地棉。

3.含有如下組合的產品在篩選與棉花抗旱性相關基因中的應用：

(1)限制性內切酶EcoR I、Hpa II和Msp I；

(2)針對EcoR I的接頭，以及針對Hpa II和Msp I的接頭；

所述針對EcoR I的接頭由序列表中序列1和序列2所示的兩條單鏈DNA分子互補配對形成；所述針對Hpa II和Msp I的接頭由序列表中序列3和序列4所示的兩條單鏈DNA分子互補配對形成；

(3)針對EcoR I的預擴增引物和針對Hpa II和Msp I的預擴增引物；

所述針對EcoR I的預擴增引物為序列表中序列5所示單鏈DNA分子；所述針對Hpa II和Msp I的預擴增引物為序列表中序列6所示單鏈DNA分子；

(4)針對EcoR I的選擇性擴增引物和針對Hpa II和Msp I的選擇性擴增引物；

所述針對EcoR I的選擇性擴增引物為序列表中序列7、序列8、序列9和序列10所示單鏈DNA分子；所述針對Hpa II和Msp I的選擇性擴增引物為序列表中序列11、序列12、序列13和序列14所示單鏈DNA分子。

4.根據權利要求3所述的應用，其特征在于：所述棉花為陸地棉。