[發(fā)明專(zhuān)利]一種香蕉葉斑病菌分子檢測(cè)引物及其快速檢測(cè)方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201710130113.7
• 申請(qǐng)日: 2017-03-07
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN106868147B
• 公開(kāi)（公告）日: 2020-01-21
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 杜宜新;石妞妞;陳福如;阮宏椿;甘林;楊秀娟;代玉立
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 福建省農(nóng)業(yè)科學(xué)院植物保護(hù)研究所
• 主分類(lèi)號(hào): C12Q1/6895
• 分類(lèi)號(hào): C12Q1/6895;C12N15/11;C12Q1/04;C12R1/645
• 代理公司: 35100 福州元?jiǎng)?chuàng)專(zhuān)利商標(biāo)代理有限公司
• 代理人: 蔡學(xué)俊;林文弘

1.一種香蕉葉斑病菌分子檢測(cè)引物，其特征在于：引物的核苷酸序列為：

上游引物RMSF：5’-AACCCTGCGTAACTGAGTCG-3’；

下游引物RMSR：5’-TTCAGCGGGTATCCCTACCT-3’；

所述引物可用于快速檢測(cè)香蕉葉斑病菌，具體包括以下步驟：

(1)提取香蕉組織的DNA；

(2) 以提取的香蕉組織的DNA為模板進(jìn)行PCR擴(kuò)增：PCR反應(yīng)體系25μL，包含2.5μL 10×PCR buffer，2.0μL濃度為2.5mmol/L的dNTP Mixture，0.15μL濃度為5U/μL的Taq酶，10μmol/L的RMSF和RMSR各0.5μL，DNA模板1μL，加ddH₂O至總體積達(dá)25μL；PCR反應(yīng)條件為：94℃預(yù)變性5min；94℃變性45sec，56℃退火45sec，72℃延伸45sec，共35個(gè)循環(huán)；72℃延伸10min；

(3)上步所得的PCR產(chǎn)物在1.0%瓊脂糖凝膠上用0.5×TBE緩沖液電泳分析，電壓為4-5V/cm；根據(jù)擴(kuò)增產(chǎn)物的大小判定檢測(cè)結(jié)果，如果能特異性擴(kuò)增出383bp的產(chǎn)物，則可判定香蕉植株組織存在香蕉葉斑病菌。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的香蕉葉斑病菌分子檢測(cè)引物，其特征在于：所述上游引物RMSF和下游引物RMSR對(duì)香蕉葉斑病菌特異性擴(kuò)增出383bp的產(chǎn)物。